细胞穿膜肽M918偶联抗体的表达纯化及其内吞效率研究

2021-02-10李雪李俊敏张雷李杉

生物技术通报 2021年12期

关键词：效率

李雪李俊敏张雷李杉

（华南理工大学生物科学与工程学院，广州 510006）

细胞穿膜肽（cell-penetrating peptides，CPPs）是一类由5-30个氨基酸组成可以穿透生物膜的短肽。CPPs可携带各种外源物质将其递送到细胞内［1-2］，与其他递送方式相比，这种有效的转运系统不受细胞类型的影响，能够与生物活性蛋白融合表达，具有较低的细胞毒性且在完成外源物质的递送后可降解［3］，近年来，在药物递送系统中得到广泛的应用［4］。穿膜肽M918衍生自抑癌蛋白p14ARF，由22个氨基酸（MVTVLFRRLRLRIRRACGPPRVRV）组成，其中含有7个带正电荷的氨基酸，属于阳离子CPP。M918在高浓度条件下仍不具有细胞毒性，并且可以有效的将大分子外源物质（蛋白质和肽核酸）以共价结合物或非共价复合物的形式递送到动植物细胞中［5］。与大多数CPP相似，M918的穿膜机制主要为能量依赖的内吞机制，尤其是巨胞饮作用，不同的是M918的内吞不依赖于细胞表面的糖胺聚糖［6］。

近年来，靶向治疗受到越来越多的关注。单链抗体（single chain antibody，scFv）分子量低（约28 kD），结构简单，易于合成，免疫原性低，广泛的应用于靶向递送载体［7］。然而，由于大多数抗癌抗体及其衍生物在肿瘤组织中的渗透性较差，其递送效率受到严重的限制［8］，因此需要寻找一种新的靶向递送至肿瘤组织的方法。

在本研究中，将穿膜肽M918与靶向人表皮生长因子受体2（human epidermal growth factor receptor-2，HER2）的scFv偶联，经过纯化得到重组蛋白M918-scFv，通过微量热泳动（microscale thermophoresis，MST）技术和流式细胞仪检测M918-scFv与HER2抗原的亲和能力及内吞效率。旨在探索一种靶向递送的新思路。