范宇宸 陆瑶 刘香男 赵博

（上海交通大学药学院，上海 200240）

泛素化是由包括泛素活化酶E1、泛素结合酶E2和泛素连接酶E3在内的一系列酶催化下发生的级联反应，是真核细胞蛋白质翻译后修饰的重要过程［1］。其中，E3识别并介导底物的泛素化，是参与泛素化的关键酶之一。E3根据结构和功能的不同主要分为RING家族、HECT家族、U-box家族和CRL家族［2］。作为U-box家族泛素连接酶的主要活性区域，U-box结构域的功能主要是与泛素结合酶E2相互作用，并将泛素Ub传递至底物蛋白上［3］。因此，U-box结构域对于该家族E3的活性至关重要。CHIP（carboxyl terminus of Hsc70/Hsp70-interacting protein）和E4B（ubiquitination factor E4B）是U-box家族泛素连接酶的2个重要成员，它们共同参与了内质网蛋白质量控制［4］。不同的是，CHIP是分子伴侣依赖型的泛素连接酶，通过N末端的TPR结构域与分子伴侣Hsc70/Hsp70相互作用介导底物的泛素化［5］；而E4B不仅具有E3的活性，还能够充当E4，发挥延伸泛素链的功能［6］，因此它们一直是U-box家族泛素连接酶研究的热点。

U-box结构域的活性与其氨基酸序列和空间结构的完整性密切相关。研究表明，发生在CHIP的U-box结构域的突变E301Q，使CHIP泛素化其底物的活性下降［7］。而通过改造E4B的U-box结构域的部分氨基酸序列，增强其与E2的亲和力，能够增强E4B的活性［8］。亦有报道表明，CHIP的U-box结构域完整序列保留的情况下，它的N末端融合一个异源性蛋白能够特异性靶向底物蛋白，同时U-box结构域依旧能传递泛素，这种融合蛋白称为嵌合泛素连接酶［9］。由此可见，U-box结构域的序列及空间结构若得以完整保留，其活性有可能得到部分保留。CHIP和E4B的U-box结构域氨基酸序列并不相似，先前的研究筛选得到的它们的潜在底物中，却有多种共同底物［10］。……