宁金卓，卓 栋，程 帆

(1武汉大学人民医院 泌尿外科，湖北 武汉 430000；2皖南医学院第一附属医院 弋矶山医院 泌尿外科，安徽 芜湖 241000)

睾丸扭转是青少年期和青春期常见的泌尿外科急症之一，其基本病理生理过程是扭转的精索使睾丸的血供减少或中断，导致组织发生缺血、坏死[1-2]。一旦确诊，应尽快恢复睾丸的血流供应，以防止睾丸生精细胞的损伤[3-4]。睾丸扭转引起的缺血损伤和睾丸复位引起的再灌注损伤均可造成睾丸组织生化和形态学变化，进一步导致生精功能的破坏，甚至不育[5]。研究证实长链非编码RNA肺癌转移相关转录本1(long non-coding RNA metastasisassociated lung adenocarcinoma transcript1,lncRNA MALAT1)可通过多种信号转导途径，在多种系统和器官的缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury，IRI)过程中发挥作用，但IncRNA MALAT1对睾丸IRI的作用及其机制尚未见报道。本研究以睾丸生精细胞GC-1为研究对象，探讨IncRNA MALAT1在睾丸IRI过程中的作用，为睾丸扭转发病机制研究提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验试剂及器材 小鼠睾丸精原细胞GC-1,美国ATCC细胞库；DMEM培养基和胎牛血清,美国Gibco公司；转染试剂Lipofectamine2000及Trizol试剂,美国Invitrogen公司；MTT检测试剂盒及AnnexinV-FITC/PI凋亡试剂盒，美国Biovision公司；RNA快速提取试剂盒,广州威佳科技有限公司；逆转录试剂盒及SYBR Green real time PCR试剂,Takara 生物有限公司。

1.2 细胞培养及转染 DMEM培养基培养精原细胞GC-1，培养条件为37℃、体积分数5%的CO2。细胞传代培养后给予缺氧3h环境后，复氧24 h后进行细胞转染。实验组转染IncRNA MALAT1和Si-MALAT1，对照组转染空白的NC和Si-NC。转染6 h后更换培养基继续培养24h，收集细胞进行后续实验。

1.3 逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中IncRNA MALAT1和miR-214的表达 TRIzol试剂提取各组细胞总RNA,逆转录合成cDNA，PCR仪进行扩增，检测IncRNA MALAT1和miR-214的表达。……