程 峰,窦晋涛,2，张 庸,3,王 祥,4，吴志浩,5

(皖南医学院 1.肿瘤微环境研究室;2.麻醉学院;3.临床医学院;4.检验学院;5.基础医学院，安徽 芜湖 241002)

据统计，肺癌发病率居所有癌症之首，是预后极差的恶性肿瘤，5年生存率仅为19%[1]。尽管化疗以及近年来兴起的肿瘤免疫治疗对肺癌显示很好的作用[2]，然而肺癌细胞仍然表现出耐药现象[3-4]，给肺癌的诊疗带来了一定的困难。因此寻找其他的靶点以及开发新的药物变得尤为重要。

近年来大量研究发现肠道菌群生态与人体健康密切相关[5]。尿石素A(Urolithin A)是一种肠道代谢产物。石榴中含有大量的多酚类鞣酸，食用后经肠道微生物分解后形成活性产物Urolithin A[6]。Urolithin A具有抗氧化[7]、肌肉重塑[6]、抗炎症[8]的作用。本研究旨在探究Urolithin A对肺癌细胞的杀伤作用，为临床用药提供指导。

1 材料与方法

1.1 细胞株、主要试剂和仪器 人肺癌细胞系A549(中科院细胞库)，Urolithin A(SIGMA)，MTT(Beyotime)，SA-β-gal试剂盒(Beyotime)，膜和胞浆蛋白提取试剂盒(Beyotime)，Laemmli 2×浓缩液(SIGMA)，Annexin V-FITC/PI试剂盒(BD公司);p53抗体，p21抗体，Cleaved PARP抗体，PUMA抗体购自CST公司。p53 shRNA(addgene)。酶标仪(BioTek)，垂直电泳仪(Biorad),凝胶成像仪(GE,AI600)，硝化纤维素(NC)膜(GE Healthcare)。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 培养条件：10%FBS的DMEM培养基，37℃，5%的CO2的培养箱，细胞均用胰酶消化传代，实验处理期均为对数生长期。

1.2.2 MTT实验 待A549细胞生长至对数期，消化离心，将其接种到96孔板中，放在37℃，5%的CO2培养箱中培养。细胞长满后，实验设置对照组、不同剂量组，每组设4个复孔。对照组、不同剂量组的Urolithin A浓度分别为0、2.5、5、10、30、50 μmol/L。48 h后用稀释后的MTT溶液处理，放置于37℃，5%的CO2培养箱孵育4 h。将96孔板拿出，在超净台里每孔加入150 μL的DMSO溶液。常温下，避光，在摇床上孵育15 min。……