多重聚合酶链式反应技术在食源性致病菌检测上的应用研究进展
2021-01-29张明娟王娟袁磊肖昭竞龙梅李根容
张明娟,王娟,袁磊,肖昭竞,龙梅,李根容
(重庆市计量质量检测研究院,重庆,400020)
食品是人类赖以生存和发展的物质基础,食品安全是关乎人民健康与国计民生的重大问题,近年来,由食源性致病微生物引起的食物中毒已经成为了全球共同关注的食品安全问题,根据世界卫生组织提供的数据,全球食源性疾病患者总人数数以亿计,平均每年都会发生上亿的腹泻病例,超过300万的5岁以下儿童因此丧命,其中超过70%的腹泻是由生物源性污染食品造成[1]。因此,加强食品中致病微生物监测,以应对食品安全突发事件,已成为各国政府和国际相关组织所面临的迫切任务。
1 我国现行食源性致病菌检测方法
目前,我国开展食源性致病菌检测主要依靠传统的培养法,包括细菌培养、血清学、生化鉴定等过程,依据标准主要是GB 4789系列[2-19]和GB 8538[20]。传统培养法检测受微生物生长情况影响较大,并且其检测周期长,一般需要4~7 d,操作也繁琐复杂,十分耗时耗力,已不能满足我国公共卫生突发事件应急检测的需要。
近年来,分子生物学技术发展十分迅速,致病菌检测标准在制定中从传统的培养方法逐渐转变为分子生物学方法,查阅目前现行标准,在致病菌检测中主要利用的分子生物学技术为传统聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术[4,10]、实时荧光定量PCR技术[18,21-22]、环介导恒温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术[23-24]、数字微滴PCR技术[25]、飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight,MALDI-TOF)技术[26]等,具体如表1所示。
分析其标准类别,发现使用分子生物学技术标……
