梁 猛，周今朝，孙训英，贺超凡，张克甲，胡 柯

蚌埠医学院生命科学学院，安徽 蚌埠 233030

雌激素双酚A（BPA）是由两个不饱和酚环组成的单体，其结构与己烯雌酚类似，具有弱雌激素活性［1-4］。BPA与雌性生殖细胞的分子功能存在显著关联，其能够降低卵母细胞质量，影响减数分裂，进而调控卵母细胞发育［5-8］。BPA暴露显著促进小鼠卵巢组织中凋亡相关的支架附着因子B样转录调节蛋白表达，进而抑制小鼠卵泡发育［9］。BPA能够阻止小鼠有腔卵泡颗粒细胞G2期向M期过渡，诱导细胞凋亡［10］。哺乳动物腔前卵泡颗粒细胞对于卵泡早期发育的激素及营养物质调控至关重要，而关于BPA对小鼠腔前卵泡颗粒细胞的调控研究，目前暂无报道。本研究通过体外培养腔前卵泡颗粒细胞和孕鼠体内暴露模型，探讨BPA对腔前卵泡颗粒细胞和孕鼠及子代雌鼠卵巢的影响。深入研究不同BPA浓度暴露对于对体外卵巢腔前卵泡颗粒细胞功能和孕鼠及子代雌鼠卵巢发育调控，将揭示BPA对早期卵泡发育的浓度依赖分子机制，并为临床制定有效的预防措施提供参考。

1 材料和方法

1.1 试剂

FBS、双抗和 DMEM/F12（Life Technologies），CCK-8（Dojindo Laboratories），胰酶，细胞周期检测试剂盒、细胞凋亡检测试剂盒、BCA试剂、SDS-PAGE凝胶和JC-1线粒体膜电位检测试剂盒（碧云天），Protease inhibitor cocktail（Roche），RIPA 裂解液（Millipore），Trizol试剂（Invitrogen），PrimeScriptTMRT reagent kit和TBGreenTMPremixExTaqTMII kit（TaKaRa）。

1.2 动物和细胞

ICR雌鼠由蚌埠医学院实验动物中心提供，选取10～12 d雌鼠分离卵巢腔前卵泡颗粒细胞［11］，选取怀孕8 d孕鼠进行BPA（索莱宝）体内暴露实验。分离出的颗粒细胞培养在5% CO2和37℃培养箱中，所用培养基为添加10% FBS和1%双抗的DMEM/F12培养基中培养。……