郭鹏波 王彦红 章波 张小慢

急性呼吸道感染是全世界婴幼儿发病和死亡的重要病因，约有30%的病例是由病毒引起[1]。在我国儿科门诊中，急性呼吸系统病毒感染性疾病占大部分[2]。此外，肺炎支原体感染和肺炎衣原体感染在临床表现上与病毒感染相似，均可导致发热、咳嗽、乏力、头痛、打喷嚏、流鼻涕等临床症状，临床医生很难鉴别，因其病原体的特殊性，治疗上与病毒存在很大不同，不予区分的治疗就会耽误病情。因此，明确鉴别病原体具有重要意义，可以协助医生选择特异性药物，提高治疗的针对性和时效性。呼吸道病原体的流行有一定的地域、季节、年龄分布特点。本研究还可以帮助相关人员了解郑州地区急性呼吸道感染患儿病原体流行情况，为临床诊治和疾病预防控制提供参考。

资料与方法

一、研究对象

2019年3月-2020年2月郑州儿童医院急性呼吸道感染住院患儿共11299 例，其中男孩6638例，女孩4661例，0～3(不含)岁6306例，3～6岁3231例，6岁以上1762例。急性呼吸道感染诊断标准参考《诸福堂实用儿科学(第8版)》[3]。

二、标本采集与检测

采集患儿咽部分泌物、痰液或肺泡灌洗液，置于VTM运送培养基(青岛海博生物技术有限公司)内，立即送到实验室，4℃保存，并于两天内检测。采用台湾圆点公司的TANBead核酸提取试剂盒提取总核酸，基于毛细管电泳的多重PCR法检测12种呼吸道病原体，包括甲型流感病毒H1N1(以下简称H1N1)、甲型流感病毒H3N2(以下简称H3N2)、乙型流感病毒(InfB)、腺病毒(HADV)、博卡病毒(Boca)、鼻病毒(HRV)、副流感病毒(HPIV)、肺炎衣原体(Ch)、偏肺病毒(HMPV)、肺炎支原体(MP)、冠状病毒(HCOV)和呼吸道合胞病毒(HRSV)。该试剂盒购自宁波海尔施基因科技有限公司，具体操作按照试剂盒操作要求。

三、统计方法

采用SPSS19.0软件进行分析。计数资料用例数和百分率(% ) 表示，两组间差异比较采用卡方检验。P<0.05为差异有统计学意义。

结 果

一、核酸检测结果

郑州儿童医院急性呼吸道感染住院患儿标本11299份，检测结果阳性8742例，总体阳性率为77.37%[95%Cl：(0.7660,0.7814)]，其中，单纯感染6943例(79.42%)，混合感染1799例(20.58%)。阳性标本中HRV阳性的标本最多，2859份，阳性率25.3%；其次为MP，2047份，阳性率18.12%；其他依次为HRSV，15.78%(1783/11299)；H3N2，9.05%(1023/11299)；HADV，8.66%(978/11299)；HPIV，7.22%(816/11299)；InfB，3.27%(370/11299)；HMPV，3.27%(369/11299)；Boca，2.02%(228/11299)；HCOV，1.95%(220/11299)；Ch，0.41%(46/11299)；H1N1，0.11%(13/11299)。阳性标本的病原体构成百分比(见图1)所示。

图1 阳性标本的病原体构成百分比

二、不同性别患儿病原体检出情况

仅HRV和MP的阳性检出率有统计学意义，其他的病原体阳性检出率无明显差异(见表1)。

表1 郑州地区不同性别患儿病原体检查阳性例数[n(%)]

三、不同年龄段患儿的病原体检出情况

依据就学阶段，将急性呼吸道感染患儿分为三组，0～3(不含)岁组、3～6岁组、大于6岁组。0～3(不含)岁组患儿病原体检出率前4位的是:HRSV、HRV、HPIV、MP。0～3(不含)岁组患儿HRSV阳性检出率明显高于其他年龄组，差异有统计学意义(χ2=565.9，P<0.05)。3～6岁组患儿病原体检出率前4位的是:HRV、MP、HADV、H3N2。大于6岁组患儿病原体检出率前4位的是: MP、H3N2 、HRV、 HADV。大于6岁组MP阳性检出率明显高于其他年龄组，差异有统计学意义(χ2=1105.5，P<0.05)(见表2)。

表2 郑州地区不同年龄段儿童的阳性例数[n(%)]

四、12种病原体的感染时间分布

H3N2、HRSV全年散发，冬季为高发季节。MP主要在秋季高发。HADV、HPIV、HRV、HCOV全年都有发生，夏季检出率明显高于其他季节。InfB全年可有发生，高发季节为冬春季。HMPV、Ch、H1N1、Boca全年散发，无明显季节性差异。(见图2)。

图2 阳性检出率时间分布图

讨 论

本研究以引发儿童急性呼吸道感染的12种呼吸道病原体为检测对象，以病原体中的高度保守序列为靶区域，同时加入多种引物进行RNA/DNA扩增；采用毛细管电泳方法对不同片段大小的扩增产物进行分离，得到检测结果；同时检测样品中的人RNA和人DNA作为内参，可以在试验中检测标本质量，保证检测结果的有效性；本检测含逆转录PCR内参，用于核酸提取、扩增和毛细管电泳等所有试验流程，可以对整个流程进行监控，便于查找检测失败的原因。整个检测过程耗时短、机械化程度高，4 h之内就可以完成 8个样本的检测，人为操作时间不超过半小时。

不同地区急性呼吸道感染儿童非细菌性病原体总阳性率有一定差异。郑州地区2019年3月-2020年2月急性呼吸道感染住院儿童非细菌性病原体总阳性率为77.37%，高于长春地区2017年1月-2018年2月的总阳性率62.82%[4]。中国疾病预防控制中心的监测资料显示大陆的流感流行模式主要有两种，南方地区主要在夏季流行，北方地区则在冬季流行[5]，本研究显示，H3N2在2019年12月-2020年1月呈现爆发态势，检测结果的季节分布特点与北京地区报道一致[6]。Zhang等[7]报道在全球温带地区，HRSV在寒冷干燥的环境中致病性最强。 我们的研究中，HRSV在郑州地区的阳性率在2019年12月到来年1月达到高峰，与Zhang等[7]、谢菲等[8]报道一致。 儿童HADV感染有明显的时间分布特点，北方地区冬春季节发病率高，而南方以春夏季高发[9-11]，本研究显示HADV全年可发，夏季的阳性率稍微高于其他季节，考虑郑州地处南北方交界处，急性呼吸道感染患儿可来自于南方和北方地区，所以HADV全年都有发生，季节差异相对不明显。HRV在急性呼吸道感染患儿中阳性率较高，是常见的呼吸道病原体，本研究中HRV的阳性率与流行情况和成都地区大致相同[12],总体阳性率25.3%,每年夏季高发，但是郑州的高发季稍微提前，可能与郑州地区7月平均气温较高有关。HCOV的阳性率比刘军等[13]报道的稍低，具体原因有待探讨。HMPV、Ch、Boca、H1N1全年散发，阳性率与季节因素关系不大。

郑州地区急性呼吸道感染患儿病原体阳性率与性别的相关性总体上不明显，仅HRV和MP的阳性率在不同性别的分布差异有统计学意义，与蒋华芳等[14]报道的有所不同，具体原因有待探讨。

此外，郑州地区急性呼吸道感染患儿病原体流行情况与年龄有关。0～3(不含)岁组患儿病原体检出率前4位的是:HRSV、HRV、HPIV、MP。3～6岁组患儿病原体检出率前4位的是:HRV、MP、HADV、H3N2。大于6岁组患儿病原体检出率前4位的是: MP、H3N2 、HRV、 HADV。H3N2在3～6岁患儿和大于6岁患儿中检出率较高，考虑与外界接触机会增多，增加感染机会有关。 MP主要通过飞沫传播，还可通过接触传播，全年可发，夏末秋初为高发季，患儿以6～15岁儿童居多。本研究中MP的检出率随着年龄增长呈现增高趋势，主要感染6岁以上儿童，与瑞典报道一致[15]。HADV在3～6岁组患儿中检出率最高，既与北京地区的报道[16]不同，也与苏州地区[10]不同。HMPV、Boca、HCOV的检出率大体上与患儿年龄呈负相关，随着年龄增长，感染率呈下降趋势。可能是由于低龄儿童免疫功能尚未发育完善，免疫力较低，而随着年龄增长，免疫功能逐渐发育完善，免疫力提高，抵御病原体的能力增强。Ch、H1N1的检出率与患儿年龄的关系不大，差异无统计学意义。

郑州地区急性呼吸道感染儿童最常见的病原体是HRV，12种呼吸道病原体的阳性率随月份变化呈现不同的特点；甲型流感病毒H1N1型和肺炎衣原体(Ch)的阳性率与儿童年龄无关，其他病原体的阳性率与儿童年龄相关。急性呼吸道感染在儿童中发病率高，并且可重复感染，分析郑州地区急性呼吸道感染儿童的病原体流行情况对临床诊疗有重要意义，可以帮助临床医生有针对性的采取预防措施、减少检查项目、开具特异性的抗生素，提高诊疗效果，缩短诊疗时间。

本研究尚有不足之处：第一，缺乏急性呼吸道感染住院儿童细菌感染的分析数据；第二，所有标本来自同一医院，未能理想的反应郑州地区急性呼吸道感染住院儿童的病原体流行情况。