陈云欢 吴旋 林幸清 汪欣

补阳还五汤，出自清代王清任《医林改错·卷下·瘫痿论》，由生黄芪、当归尾、赤芍、川芎、桃仁、红花、地龙七味中药组成。本方重用黄芪，大补脾胃之元气，使气旺血行，祛瘀通络，并配伍归尾活血养血，使化瘀而不伤血；佐以川芎、赤芍、桃仁、红花活血祛瘀，地龙通络；诸药合用，从而达到气旺则血行，活血而又不伤正[1]。本方在临床上广泛用于治疗脑缺血患者。脑缺血在中医学上属于中风病范畴，气虚血瘀是本病的主要证型，治疗多以益气活血为主[2]。近年研究表明，补阳还五汤能够从多靶点、多通路改善大脑缺血再灌注损伤，提高新生神经元数量，促进神经损伤修复[3-5]。为了探索补阳还五汤对脑缺血后神经功能修复的作用靶点及防治机理，本实验通过构建大鼠脑缺血-再灌注模型，分别采用不同剂量的补阳还五汤进行干预，通过分析自噬-溶酶体信号通路LAMP 蛋白表达变化探讨补阳还五汤的作用机制。

1 材料与方法

1.1 动物及分组

健康清洁级雄性成年Wistar 大鼠50 只，体质量约100 ～150g，购自福建中医药大学动物实验中心。随机分成假手术组（145.99±0.81）g、模型组（146.77±0.97）g、补阳还五汤常规剂量组（146.46±1.13）g、补阳还五汤2 倍剂量组（146.35±1.03）g、补阳还五汤10 倍剂量组（147.01±1.12）g，每组10 只。

1.2 主要试剂和仪器

补阳还五汤（购自北京康仁堂药业有限公司），Western 一抗稀释液、Western 二抗稀释液、β-Actin 抗体、Western 转膜液、Western 封闭液、SDS-PAGE 电泳液（碧云天生物科技公司），LAMP2 兔多克隆抗体、二抗HRP 标记的羊抗兔IgG 抗体（美国PTG 公司），Western blot 电泳设备（Bio-rad 公司）。

1.3 实验方法

1.3.1 大鼠脑缺血模型构建 取清洁大鼠，术前禁食12 h，麻醉后，固定头部及四肢，暴露颈部，切开皮肤钝性分离至暴露颈动脉，采用改良线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞模型。……