黄天舒,裴丽鹏

宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，2018年发病率为3.2%，是20～39岁女性肿瘤相关死亡的第二大原因[1-2]。在宫颈癌早期患者行手术切除治疗，但是影响了年轻女性患者的生育能力，使得患者的生存质量和生命健康大打折扣。晚期或复发性宫颈癌的可用治疗方法却有限，放疗和化疗引起的毒副反应通常会严重影响患者的生活质量，且目前基本无法治愈[3]。虽然有效的巴氏涂片筛查技术提高了宫颈癌患者的诊断率，以及CryoPen和热凝等技术已改善了宫颈癌的预防，但每年发生的宫颈癌病例数量仍然不断增加[4-5]。因此急需开辟宫颈癌新的治疗策略。人乳头瘤病毒(HPV)感染是宫颈癌发病的高危因素[6]，但是HPV感染的细胞发展为肿瘤细胞还需要其他的因素[7]。研究报道，HPV可诱导微小RNA-135a(microRNA-135a, miR-135a)的表达以促进宫颈癌的转化和进展，与癌前病变相比，miR-135a在恶性宫颈鳞状细胞癌中过表达[8]。miR-135a可能是宫颈癌癌变过程中发挥重要作用的miRNA。miRNA通过与靶mRNA的3'-非翻译区(3'-UTR)结合发挥其调控作用[9]，因此本研究通过分析miR-135a调控的靶基因研究miR-135a在宫颈癌中发挥重要作用的分子机制，获得miR-135a作为宫颈癌治疗候选靶点的依据。

1 材料与方法

1.1主要试剂和材料 宫颈癌细胞C33A、Caski、HeLa和永生化宫颈上皮细胞H8(中国上海细胞库)，培养基、FBS和胰酶(美国Giboc公司)，Trizol试剂(日本TaKaRa公司)，Bestar 1st Strand cDNA合成试剂盒(上海DBI® Bioscience公司)，OneStep RT-PCR Kit试剂盒(德国QIAGEN公司)，miR-135a、PTEN、内参U6和GAPDH引物(上海捷瑞生物工程有限公司合成)，pGLO-PTEN-野生型质粒(PTEN-wt)、pGLO-PTEN-突变型质粒(PTEN-mut)购自上海吉凯公司；双荧光……