于 芝，吴茜萍，焦华杰，汪 婷，徐卉芳

骨关节炎(OA)是最常见的慢性关节疾病，发病率随着年龄的增长而增加[1]。该疾病会影响大多数65岁以上的人，是老年人行动能力受损的主要肌肉骨骼原因[2]。膝骨关节炎(KOA)是骨关节炎最常见的类型[3]。右美托咪定(DEX)是一种快速作用的-2肾上腺素能受体激动剂，具有镇静、镇痛等多种功效，目前被临床广泛应用[4-5]，同时DEX兼具有抗炎作用，DEX在KOA的治疗具有潜在应用价值，但目前尚无相关文献报道。为进一步明确右美托咪定在KOA治疗中的价值及其机制，笔者设计了本次研究，旨在为DEX治疗KOA的临床应用提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料：本次研究于2019年1-12月在宁夏医科大学完成。人关节软骨细胞购自Scien Cell公司。细胞凋亡检测试剂盒购自碧云天(C1062S)，蛋白抗体p-Smad3(bs-2225R)购自Bioss公司，蛋白抗体Bcl(12789-1)、Bax(50599-2)、Beclin(11306-1)、TGF-β1(21898-1)、Smad3(25494-1-AP)、P62(18420-1)、LC3(14600-1)以及HRP标记山羊抗兔二抗(SA00001-2)购自Proteintech公司。

1.2 软骨细胞培养：人关节软骨细胞培养条件：37 ℃培养箱，5% CO2；细胞培养液：DMEM培养液+10%FBS+1%双抗，细胞融合达到70%左右进行传代。

1.3 细胞实验分组及处理：取对数生长期人关节软骨细胞分为正常对照组(n=3)、模型组(n=3)、DEX治疗组(n=3)。正常对照组细胞正常培养，不做任何特殊处理；模型细胞加入10 ng/mL脂多糖体外构建关节炎软骨细胞炎症模型[6]；DEX治疗组细胞加入0.01 μmol/L DEX，30 min后加入10 ng/mL脂多糖。

1.4 细胞CCK8增殖检测：3组细胞分别接种于96孔板中，每空104个细胞，每组3个重复，分别于接种后的24、48、72 h加入10% CCK8工作液，37 ℃孵育2 h 后，酶标仪检测450 nm吸光度值，记录数据。

1.5 细胞凋亡检测：0.25%胰酶消化，离心(300 g，5 min)，PBS洗涤收集各组细胞，70%乙醇固定30 min，PBS离心洗涤3次，加入凋亡检测工作液，4 ℃避光反应30 min后，流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。……