牙周细胞膜色谱联用高效液相筛选三七有效成分的研究
2021-12-02李佳琦
刘 丽,张 新,李 成,代 雯,李佳琦,尹 东
慢性牙周炎是常见的口腔疾病,在我国患病率高达96.80%[1]。目前慢性牙周炎的治疗方法仍然是基础治疗、手术治疗及药物治疗。临床上常用的药物多为全身口服、含漱剂等抗生素类,虽能快速改善症状,但药效维持时间短[2];中药亦能有效改善症状,且毒副作用小。中药有效部位的提取方法很多,其中超声萃取是一种非常有效的方法[3]。高效液相色谱法(HPLC)测中药有效成分及浓度,具有高效、高灵敏度、分析速度快以及载液流速快等特点[4]。细胞膜色谱法(CMC)能够在特定的活性细胞膜筛选模型上直接确定与膜受体发生结合的中药某种活性部位和活性成分,进一步进行分离和鉴定,从而达到快速、高效和准确筛选的目的[5]。牙周膜细胞的分离培养是体外研究牙周组织的良好实验模型[6]。辛伐他汀(SIM)对牙周组织的抗炎和再生有直接或间接作用[7],适宜浓度SIM能促进人牙周膜细胞(hPDLC)增殖、ALP活性以及细胞成骨转化,且可能与ERK、Wnt、BMP信号通路有关[8]。本研究通过HPLC联合CMC法对牙周膜细胞膜与中药三七的有效成分进行筛选,以期能对牙周炎防治的新药开发做初步的筛药实验。
1 资料与方法
1.1 一般资料:Hair生物安全柜(青岛海尔特种电器有限公司),CO2培养箱(BB16)(德国 Heraeus),倒置相差显微镜(日本 Nikon);细胞膜色谱柱芯组件(10 mm柱长,2 mm 内径,0.22 μm 筛板孔径)(深圳逗点生物技术有限公司);RPL-ZD10型装柱机(大连日普利科技仪器有限公司);VICI AG 10G-0911V10通切换阀(美国 Valco仪器公司);Concentrator真空旋转蒸发仪(德国eppendorf公司);……
