郭秉楠，燕宪亮，许 铁

(徐州医科大学卫生应急研究所，徐州医科大学附属医院急救中心，徐州 221004)

巨细胞病毒肺炎其病理表现为弥漫性肺泡损伤、上皮细胞坏死，炎性细胞浸润，肺泡间隔增宽等，严重者发展为急性呼吸窘迫综合征[1]。同时，作为免疫功能低下人群感染人巨细胞病毒所诱发的最严重的疾病之一，其发病率为50%～70%，死亡率高达25%～31%[2]。因而，探讨其发病机制以便更好地防治显得尤为重要。本文在小鼠模型中研究发现，白细胞介素-33(interleukin-33,IL-33)蛋白促进鼠巨细胞病毒(murine cytomegalovirus,MCMV)肺炎的进程可能是通过肺组织中大量骨髓原性的抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cell,MDSC)活化实现的。

1 材料与方法

1.1 实验试剂 6～8 周龄Balb/c 小鼠购于徐州医科大学，ST2-/-小鼠由苏州大学肿瘤与分子实验室馈赠，所有小鼠均在无菌条件下饲养，研究符合徐州医科大学实验动物伦理委员会要求；MCMV(Smith 株)由山东医学科学院秦立增教授馈赠；低熔点琼脂糖购于Sigma 公司；RPMI1640 培养基，胎牛血清购自Gibco 公司；实时定量聚合酶链式反应(Real-time polymerase chain reaction,Real-time PCR)试剂盒购于Thermo Fisher；IL-33 酶联免疫吸附法(enzymelinked immunoabsorbent assay,ELISA)检测试剂盒，流式抗体Anti-CD11b-APC(M1/70)、Anti-Gr1-PE(RB6-85C)购于Biolegend 公司；引物合成于上海生工生物工程有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 SDS-PAGE 和Western Blot IL-33 蛋白样品中加入5×Loading buffer，100 ℃煮样10 min；电泳1.5 h后，考马斯亮蓝染色，脱色液脱色，至蛋白条带清晰，拍照保存。SDS-PAGE 电泳后，转印到PVDF 膜上；一抗(1∶1 000)4 ℃孵育过夜后，等渗盐缓冲液(Tris buffered saline Tween,TBST)漂洗3 次，10 min/次；二抗(1∶5 000)室温孵育2 h 后，TBST 漂洗3 次，10 min/次；增强型化学发光(enhanced chemiluminescence,ECL)法检测并拍照分析条带灰度值。

1.2.2 ST2-/-小鼠的鉴定 取待鉴定小鼠尾巴2 mm于EP 管中，加入蛋白酶K 裂解液，55 ℃水浴过夜后，4 ℃，12 000 g，离心5 min，取上清进行聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)鉴定小鼠基因型。……