周兴波，刘 岩*

（1.秦皇岛工人医院泌尿外科，河北 秦皇岛 066000；2.锦州医科大学附属第一医院泌尿外科，辽宁 锦州 121000）

肾细胞癌是临床中常见的泌尿系统肿瘤之一，对放、化疗不敏感，手术治疗是早期肾癌最主要的治疗方式，但对晚期肾癌效果不佳，所以探索晚期肾癌的治疗方法是目前较为热门的课题[1]。白花蛇舌草也叫蛇舌癀、鹤舌草，属于茜草科耳草属植物，整株都可作为药材，性寒、微苦，有学者对其进行研究发现其具有免疫调节、杀菌消炎、抗氧化及抗肿瘤等作用[2]，其中最突出的作用是抗肿瘤，特别是对肾癌、直肠癌、胃癌等，但其机制尚不明确，可能与其具有抗氧化性有关[3]。本文通过体外实验探究白花蛇舌草对人肾癌786-0细胞的抑制作用，现总结如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1 材料：白花蛇舌草辽宁省中医药房，提取物（EEHDH）由我院实验室完成。取100g白花蛇舌草，加入20倍剂量的浓度为80%的乙醇，常温下浸泡5小时后在85℃下提取2次，合并滤液，浓缩冷却干燥，得到EEHDH粉，4℃条件储存留作后用。人肾癌786-O细胞购自北京协和细胞所。

1.1.2 主要试剂及仪器：鼠抗人MMP2/MMP9单克隆抗体，TUNEL检测试剂盒，美国BeckmanCoulter流式细胞仪，BG-subMIDI水平电泳仪。

1.2 方法

1.2.1 流式细胞分析：分别用5个培养板取浓度为5*106/mL的786-O细胞，其中4个分别加入浓度为10、20、40、80mg/L的EEHDH，标号为1、2、3、4，另一只培养板加入等体积培养液作为对照，标号为5，每组设置3个复孔，培养48小时后使用流式细胞仪进行检测。

1.2.2 TUNEL技术：取上述培养48小时后的细胞使用4%浓度的多聚甲醛在室温条件下封闭30min，滴加TUNEL反应液50ul，37℃、湿润条件下孵育1小时，同时另一组滴加POD液50ul，同等条件下孵育半小时作为对照，最后滴加DAB显色液50ul，使用中性树胶封片。……