闵继斌，叶先才，王志坚，刘胜兵

（1.嘉善县中医院，浙江 嘉兴 314100；2.嘉兴学院医学院，浙江 嘉兴 314000）

吗啡及其衍生物是临床解除疼痛的主要药物,是临床应用广泛的镇痛药，长期应用吗啡后其镇痛效果会渐弱，出现吗啡耐受，甚至痛觉过敏。KCC2参与Cl-稳态，成熟神经元胞内的氯离子外排作用可以使成熟神经元胞内保持低氯离子浓度，从而使γ成氨基丁酸离子型受体发挥抑制性作用。KCC2参与各种病因导致的痛觉过敏，脊髓损伤可以引起神经系统KCC2表达改变[1]。脊髓损伤等可以导致脊髓中运动神经元胞膜的KCC2表达下调，引起Cl-在细胞内聚集。研究发现脊髓KCC2表达变化与炎性痛或一些病理性疼痛相关[2-3]。大鼠吗啡处理后，KCC2在脊髓的表达可明显降低。基因治疗是作为靶向性的生物基因治疗方法，其具有较强的靶向性。用编码人类神经营养因子3腺相关病毒（AAV-NT3）治疗脊髓T9段受伤的大鼠，AAV-NT3基因治疗同运动结合减缓脊髓损伤后肌肉痉挛[4]。通过在脊髓鞘内注射病毒包装的KCC2，从而在脊髓过表达KCC2，从而有效缓解神经损伤导致的疼痛过敏。脊髓过表达KCC2后是否对吗啡耐受产生影响及相关机制尚未有研究[5]。本研究通过大鼠脊髓鞘内递送KCC2，使其在脊髓过表达，检测相关通路蛋白表达，探讨KCC2过表达延缓吗啡耐受的相关机制。

1 材料与方法

1.1 材料

DMEM培养基和胎牛血清（Gibco），invitrogen lipofectamine 2000 转染试剂盒（Invitrogen），苯巴比妥钠（上海上药新亚药业有限公司），吗啡（东北制药集团沈阳第一制药有限公司），250-300g雄性SD大鼠（浙江省实验动物中心），KCC2抗体、NMDAR抗体和PKC抗体（Cell signaling technology）。……