李向群 ，韩菲 ，尹珊珊 ，邓海清 ，刘建凯 ，袁波

1.沈阳药科大学，辽宁沈阳110016；2.北京民海生物科技有限公司，北京102600

b 型流感嗜血杆菌（Haemophilus influenza type b，Hib）为革兰阴性荚膜型致病菌。在 6 种（a、b、c、d、e、f）荚膜型流感嗜血杆菌中致病力最强，可引起5 岁以下幼儿脑膜炎、肺炎及其他侵袭性疾病如败血症、会厌炎、心包炎等［1］。目前最有效的防范措施是注射Hib 结合疫苗。该疫苗是将Hib 精制多糖与载体蛋白共价结合得到T 细胞依赖抗原，激发婴幼儿（≤2 岁儿童）、老人及免疫缺陷患者体内的免疫应答，产生免疫记忆，诱生免疫球蛋白IgG，较单纯多糖疫苗诱生的IgM 更有效，且能维持较长时间，具有良好的保护力［2］。

Hib 精制多糖是Hib 结合疫苗的中间产品，分子大小是评价其质量的重要指标，《中国药典》三部（2020 版）通则3419 采用体积排阻法（size exclusion chromatography，SEC）测定Hib 精制多糖分子大小及分配系数（KD）值对应保留体积的回收率（RX），该方法根据多糖分子在多孔性凝胶色谱柱中从大到小分离的原理，利用凝胶色谱柱的分子筛机制，采用AKTA 层析系统分离供试品，再用检测器对分离出的物质进行检测，得到供试品在层析柱中的KD及相对分子质量分布情况。《中国药典》三部（2020 版）规定Hib 精制多糖采用琼脂糖CL-4B 凝胶柱检测，KD≤ 0.5 的多糖 RX应大于 50%［3］。

Hib 精制多糖属天然水溶性高分子化合物，以微生物为原料通过物理化学方法提取获得［4］。分子质量及分子质量分布是表征高分子物质的最基本参数之一，也是高分子性能研究和生产过程中需控制的重要参数。通常可用4 种分子质量表示方式表征高分子分子质量大小：数均分子质量（Mn）、重均分子质量（MW）、Z 均分子质量（M）z及黏均分子质量（Mη）。……