李国秀 ，欧云文 ，马炳 ，李茜 ，代军飞 ，丁耀忠 ，刘磊 ，张杰

1.甘肃农业大学动物医学院，甘肃兰州730070；2.中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室，甘肃兰州730046；3.开江县动物疫病预防控制中心，四川达州636250

猪圆环病毒（porcine circovirus，PCV）主要分为3 个基因型，即 PCV1、PCV2 和 PCV3［1-2］，PCV2 属无囊膜的、单股、环状、负链DNA 病毒，为已知最小的动物病毒之一，是断奶仔猪多系统衰竭综合征（postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS）、皮炎和肾病综合征（porcine dermatitis and nephropathy synd-rome，PNDS）的主要病原［3］。临床特征为坏死性淋巴结炎、急性肺水肿、生殖障碍及肉芽肿性肠炎，严重制约全球养猪业的持续健康发展［4-5］。PCV2包括 PCV2a、PCV2b、PCV2c、PCV2d 及 PCV2e 基因亚型，其中PCV2b 是中国猪群中主要流行的基因亚型［1，6］。PCV2 病毒粒子呈球形，直径 12 ～ 23 nm，基因组大小约为1 760 bp，含11 个开放阅读框（open reading frame，ORF），其中 ORF1、ORF5、ORF7 及 ORF-10 位于病毒基因组正链，其他ORF 位于基因组互补链。ORF1 编码病毒复制蛋白，即 Rep 蛋白［1，7-8］；ORF2 编码病毒衣壳蛋白，即Cap 蛋白，该蛋白由233 ～234 个氨基酸组成，相对分子质量约278 000，其N-端富含碱性氨基酸，序列高度保守。Cap 蛋白前41个氨基酸是核定位信号肽序列，第69 ～83 位和第117 ～131 位氨基酸是Cap 蛋白的2 个主要特异性抗原表位［9-10］。麦芽糖结合蛋白（matlose binding protein，MBP）作为重要的标签蛋白，可融合在蛋白的N-或C-端，增强细菌中过表达融合蛋白的溶解性，屏蔽毒性蛋白。同时，MBP 标签纯化技术采用麦芽糖温和洗脱，无去污剂或变性剂对蛋白活性的影响。

本研究以PCV2b 亚型 Cap 蛋白编码基因的优化序列为目的片段，采用pMAL-C4x 原核表达系统可溶性表达MBP-Cap 融合蛋白，并对其进行纯化和免疫原性分析，以期为PCV2b 病毒样颗粒（virus like particle，VLP）的体外组装及诊断试剂盒的开发奠定基础。……