刘珊珊 ，吴陈华 ，刘宇 ，3，赵尚琪 ，赫鸣睿 ，王丽 ，王天 ，何泊宁 ，张世勋 ，岳山 ，黄雯静 ，朱战波

1.黑龙江八一农垦大学动物科技学院，黑龙江大庆163319；2.黑龙江省牛病防控工程技术研究中心，黑龙江大庆163319；3.黑龙江省兽医科学研究所，黑龙江齐齐哈尔161005

程序性细胞死亡蛋白-1（programmed cell death protein 1，PD-1）及程序性死亡配体-1（programmed deathligand 1，PD-L1）被认为是外周免疫耐受和病原体特异性免疫抑制的核心［1］，于各种类型的慢性感染及肿瘤疾病中，PD-1 及PD-L1 在抑制慢性病原体激活T 细胞的生物学功能中起重要作用，可诱导T 细胞“衰竭”［2-3］。研究表明，慢性病毒感染期间，PD-1 在衰竭的T 细胞上高度表达，且阻断PD-1／PD-L1 途径，可恢复T 细胞功能，使T 细胞增殖并产生效应细胞因子［1］。HIV、HCV、HBV、低分子量病毒（low molecular weight virus，LMCV）等慢性病毒感染期间，PD-1 ／PD-L1途径与病毒特异性T 细胞的衰竭有关。在猪、鸡、猫、狗及牛体内发现PD-1／ PD-L1 途径，有助于慢性传染病的发病机制及免疫逃避的研究。用PD-1 或PD-L1特异的单克隆抗体（mAb）治疗，在临床试验及癌症患者体内均重新激活了衰竭的免疫应答，如T 细胞增殖、细胞因子的产生及细胞毒素作用［2，4-6］。

来自实验性淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒（lymphocytic choroid plexus meningitis virus，LCMV）感染的证据表明，PD-1 ／ PD-L1 通路在抑制病毒特异性CD8+T 细胞在小鼠慢性病毒感染中起关键作用［7］。在牛白血病病毒（bovine leukemia virus，BLV）感染的牛PD-L1 阻断被认为是改善针对肿瘤及慢性感染的免疫应答的适当策略［8］。前期实验使用人PD-1 抗体体外阻断 PD-1 ／ PD-L1 通路，结果表明，PD-1 在急性牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus，BVDV）感染引起的外周血淋巴细胞（peripheral blood lym-phocytes，PBL）减少及细胞凋亡中起重要作用［9］。

本研究使用原核表达系统对牛PD-1 胞外区重组蛋白进行表达，纯化后免疫小鼠制备多克隆抗体，为探讨其在牛慢性病毒感染而引起的持续性免疫抑制及免疫耐受中的作用奠定基础。……