陈对对，杨 强 ，叶 子，陈祖兵，沈世强

武汉大学人民医院肝胆外科，湖北 武汉 430060

原发性肝癌(primary liver cancer，PLC)是我国第四位常见肿瘤和第三大致死肿瘤类型[1]，其中肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)占PLC的75%～85%，尽管肝癌的靶向治疗、免疫治疗不断取得突破，且治疗方法在向个体化、系统化、综合化发展[2]，但肝癌易侵袭和转移的特性是导致患者预后不良的主要原因之一。趋化因子[3](Chemokine)作为一种小分子蛋白，与炎症反应、白细胞运输、肿瘤转移及血管生成等密切相关。趋化因子7[chemokine (C-C motif) ligand 7，CCL7],也叫单核细胞趋化蛋白3(monocyte chemotactic protein 3,MCP-3)，是趋化因子家族中的一员，与肿瘤的侵袭和转移相关[4]。目前CCL7在肝癌中的作用及机制鲜有相关报道。本研究探讨CCL7与肝癌细胞侵袭和迁移能力的关系，为肝癌的治疗进一步提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料人正常肝细胞株L02和人肝癌细胞株SMMC-7721、HepG2均购自中国科学院细胞库; RPMI-1640培养基购自美国Hyclone公司(SH30809);DMEM高糖培养基购自美国Hyclone公司(SH30022);胎牛血清购自杭州四季青生物工程材料有限公司(141215)；胰酶Trypsin购自吉诺生物医药技术有限公司(GNM25200)；重组人CCL7购自Peprotech公司(300-17)；CCL7 siRNA购自锐博公司(p201909090011)；Rutin hydrate购自美国MCE公司(HY-N0148A)；E-cadherin抗体(#14472)、Snail抗体(#3879)、JNK抗体(#9252)、p-JNK抗体(#4668)、ERK抗体(#4695)、p-ERK抗体(#4376)均购自CST公司;Vimentin抗体(ab92547)、Twist抗体(ab50887)均购自英国Abcam公司;HRP-Goat anti Rabbit二抗购自ASPEN公司(AS1107)；人CCL7酶联免疫吸附检测(ELISA)试剂盒购自ELK Biotechnology公司(ELK1167)；CCK-8检测试剂盒购自碧云天生物技术有限公司(C0038)；EnTurboTMSYBR Green PCR SuperMix试剂盒购自美国ELK Biotechnology公司(EQ001)。

1.2 细胞培养HepG2细胞用89% DMEM高糖培养基+质量浓度为100 g/L胎牛血清+1%双抗培养，L02细胞和SMMC-7721细胞用RPMI-1640培养基+质量浓度100 g/L胎牛血清+1%双抗培养。所有细胞用25 cm2透气盖培养瓶培养，放置于含体积分数为5%的CO2的37 ℃培养箱中。……