王婷婷，朱晓轩，裴小红

中国人民解放军联勤保障部队904医院苏州院区消化内科，江苏 苏州 215000

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，H.pylori)是最常见的人类病原体之一，它定植在全球约50%人口的胃壁上皮。H.pylori感染是引起胃萎缩和癌变的重要因素[1]。H.pylori被世界卫生组织列为I类致癌物，研究已经证实了H.pylori与胃癌之间的关系[2]。此外，研究发现H.pylori与胃癌转移和侵袭有关，也有研究发现H.pylori会促进胃癌细胞的迁移和侵袭[3]。最新研究显示,H.pylori会影响胃上皮细胞间的黏附，引起上皮-间充质转化(epithlial mesenchymal transition, EMT)，破坏胃黏膜屏障，但其具体影响机制尚不清楚[4]。微小RNA(microRNA，miRNA)可在转录后调控基因的表达，这种功能是通过特异性的与靶基因的信使RNA结合(message RNA，mRNA)诱导mRNA降解和翻译抑制，并且在调控胃癌细胞迁移和侵袭中起到重要作用，miR-204可通过直接靶向EMT相关蛋白发挥抑制胃癌细胞迁移和侵袭的作用[5]。本文主要分析H.pylori对胃上皮细胞迁移和侵袭的影响以及miR-204在其中的作用。

1 材料与方法

1.1 主要材料和仪器人胃上皮细胞(GES1)和H.pylori(#26695)购自美国ATCC公司。DMEM培养基购自美国Invitrogen公司。miR-204类似物(mimic)以及相应的阴性对照(negative control，NC)购自美国Thermo Fisher公司(#MC11116)。Lipofectamine 2000购自美国Invitrogen公司。细胞计数试剂盒-8(cell counting Kit-8，CCK-8)试剂盒购自中国Beyotime生物技术研究所。Transwell小室以及基质凝胶购自美国BD Biosciences公司。PCR引物购自中国Genewiz公司。Trizol试剂购自美国Invitrogen公司。逆转录cDNA试剂盒和SYBR Green PCR Master Mix qPCR试剂盒购自瑞士Roche公司。ABI 7500 PCR检测系统购自美国Life Technology公司。RIPA裂解缓冲液购自中国Beyotime公司。anti-E-cadherin(#ab1416)、anti-N-cadherin(ab18203)、anti-Vimentin(ab92547)、GAPDH(ab181602)以及对应的二抗购自美国Abcam公司。PVDF膜购自美国Bio-Rad公司。BCA蛋白测定试剂盒和ECL试剂盒购自中国Applygen公司。IX71显微镜购自日本Olympus公司。……