楼志华

（江苏省奥谷生物科技有限公司，江苏溧阳 213300）

随着细菌的研究深入到分子遗传层面，细菌RNA聚合酶（RNAP）终止转录的机制一直是基因表达研究的重点。在基因表达的调节中，对转录终止过程的调节是最重要的环节之一[1-2]。转录终止的分子基础是DNA和蛋白质的相互作用，RNA转录物中形成的特定结构会使转录复合物不稳定，目前将这样造成的转录终止归纳为两种机制：内在型和因子依赖型[3]。因此，转录终止子是和启动子同样重要的表达元件。目前，对于启动子鉴定及改造的研究已广泛开展，而对转录终止子的认识有限。现有对细菌转录终止子的认识主要来源于对大肠杆菌的研究。芽孢杆菌作为重要的工业微生物，虽然在生产中已被广泛使用，但其分子遗传仍处于起步阶段[4-5]。尤其是在转录终止元件的鉴定方面，目前还鲜有报道。本研究基于地衣芽孢杆菌基因组信息，预测并鉴定了不同的转录终止子。进一步通过考察不同终止子对淀粉酶报告基因表达的影响对其特性进行了评价。

1 材料与方法

1.1 菌株、质粒和培养基

实验中用到的枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis WB600、大肠杆菌Escherichia coli JM109均为本实验室所保藏。LB培养基、TB培养基均依照文献配置[1]，重组大肠杆菌培养基中添加100 μg/mL氨苄青霉素，重组芽孢杆菌转化子培养基中添加20 μg/mL四环素，枯草芽孢杆菌转化用培养基依照文献配置[2]。

1.2 试剂与仪器

限制性内切酶，美国Fermentas公司；T4DNA连接酶、Ex taq DNA连接酶，大连Takara公司；质粒提取试剂盒、核苷酸片段纯化试剂盒、胶回收试剂盒，Axygen公司；……