张绚，张宏刚

（1.国家知识产权局专利局专利审查协作广东中心，广东广州 510500；2.广州格拉姆生物科技有限公司，广东广州 510530）

基因突变是指由于DNA分子中碱基对的增添、缺失或改变而引起的基因结构的改变。稀有突变则指存在大量的野生型背景的突变模板，即样品基因组的突变比例非常低[1]。目前，应用分子生物学方法检测患者体内遗传物质的结构和表达水平的变化的分子诊断技术在疾病的诊断和治疗中占据举足轻重的地位，而稀有突变的分子诊断作为基因突变检测的一个重要组成部分，在技术的建立到临床的应用过程中都面临着巨大的挑战[2]。

分子诊断中的很多领域都涉及了稀有突变的检测，主要包括以下3个方面。（1）一些稀有突变可作为癌症的早期诊断和预后标记物，这种检测常以组织切片、体液（如血浆或血清）、尿液或粪便为模板（基因组DNA或RNA）来源的进行突变检测。（2）病人的微小残留病的检测，微小残留病指癌症患者经过治疗并达到缓解后残留的肿瘤细胞，可用来监控病人的病情，预测病人的复发风险。（3）稀有突变的检测在疾病的分级应用中也占有一席之地。

稀有突变检测技术面临的一个最大的难题是在野生型模板量大大超出了要检出的突变模板量的情况下，如何能够尽量减小野生型模板的影响，从而高灵敏度地将突变模板筛查出来。目前的PCR检测技术为了解决这个难题，往往采用各种手段压制野生型模板的扩增，同时富集突变模板，使突变模板的浓度比例增高而易于检测。……