庄霄玲，崔以晴，张雪莲

（1.上海复旦大学 生命科学学院，上海 200433；2.上海药明生物技术有限公司，上海 200131）

随着单克隆抗体药物的应用日益广泛，临床上对注射体积小、浓度高的抗体制剂需要越来越迫切。该类制剂浓度非常高（通常大于150 mg/mL），无论是样品的制备还是保持样品的稳定性都具有很大的挑战[1]。本文利用正交试验对系统运行的操作参数进行了优化试验，找到了较优的操作条件，并对工艺参数的选择进行了分析探讨。

1 材料与方法

1.1 实验材料

实验中用于超滤渗滤开发的样品均为经过阳离子洗脱的样品，纯度大于99%；醋酸、醋酸钠、氯化钠，购于台山市新宁制药有限公司；组氨酸、组氨酸盐酸盐，购于上海协和氨基酸有限公司；海藻糖，购于日本株式会社林原。所有试剂均符合药用级别。

Pellicon D 30 kD超滤膜包，Millipore公司；Nanodrop 2000微量紫外分光光度计，Thermo Scientific公司；Seven Excellence pH电导率计一体机，Mettler Toledo公司；XPE10002S电子天平，Mettler Toledo公司等。

1.2 实验方法

1.2.1 超滤整体工艺

起始样品进样流速和跨膜压力（TMP）优化→浓缩→换液缓冲液确定→换液时间点确定→换液→再浓缩→产品回收

室温下，在超滤膜夹具上完成所有超滤实验，并对实验过程中的中间产品进行检测分析，如用NANODROP2000测蛋白的浓度，用HPLC分子排阻法检测单体纯度等。

1.2.2 超滤单因素试验

单因素实验中，固定载量为400 g/m2，样品浓度为15 g/L，超滤膜面积为88 cm2，并处于醋酸缓冲体系中。以超滤膜透过通量作为试验指标，研究蛋白超滤在不同进口流速（11.7 mL/min、23.5 mL/min、35.2 mL/min、46.9 mL/min和 58.7 mL/min），不同的操作温度（20 ℃、25 ℃、30 ℃、35 ℃、40 ℃），不同跨膜压力（69 kPa、103 kPa、138 kPa、172 kPa、209 kPa）对蛋白透过的影响，然后进一步优化。……