罗芳芳，钱峰，梅芹

（1.上海药明生物技术有限公司，上海 200131；2.复旦大学 生命科学学院，上海 200438）

DNA免疫于1990年由Wolff等人首次发现，将编码蛋白的DNA质粒注射入小鼠骨骼肌内[1]，在肌肉细胞内表达基因产物蛋白质，从而奠定了DNA免疫的基础。通过DNA免疫技术，目的基因在体内合成蛋白质抗原，刺激机体产生特异性免疫反应[2]，获得高亲和力抗体。因此DNA免疫技术应用范围从疫苗研究、医学免疫学研究扩展至单克隆抗体药物研发。

虽然DNA免疫有多方面的优势，但免疫原性弱，免疫周期较长，因此提高其免疫原性是制备杂交瘤单克隆抗体的关键因素。

本研究选择大鼠CD138作为测试蛋白，在血液细胞中，CD138分子是浆细胞表面特异性标志[3-4]。传统杂交瘤单克隆抗体是由淋巴、脾脏细胞与骨髓瘤细胞融合产生的，但淋巴、脾脏细胞成分复杂、细胞量大，而浆细胞含量仅占1%～5%[5]，所以特异性CD138抗体对评估淋巴和脾脏细胞中浆细胞含量特别重要。但尚无市售的抗大鼠CD138特异性单克隆抗体，而CD138大小鼠种属同源性高达90.4%，免疫原性低、动物免疫反应较弱。

DNA免疫效果是由质粒本身、抗原基因、分子佐剂、递送方式等因素相互作用所决定。本研究通过对DNA质粒转录后调控元件和分子佐剂进行优化增强DNA免疫反应。通过将luciferase和大鼠CD138基 因 克 隆 入 pCAGGS-HPRE、pCAGGS-WPRE、pCAGGS-HTLV-1R和pCAGGS-FliC载体，构建重组质粒。通过细胞瞬时转染表达系统、小鼠动物模型对目的基因体外表达水平、抗原特异性免疫反应进行系统比较。

鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白作为一种新型免疫佐剂，其佐剂效应受到科学家的广泛关注。……