周永胜　胡松梅

摘 要 对大花惠兰的原球茎进行增殖、分化、生根等过程的研究，筛选出最佳增殖培养基、分化培养基、生根培养基，优化大花蕙兰组织培养育苗体系，达到繁殖系数高、成苗率高的目的。研究结果表明：最佳增殖培养基为6-BA 2 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+IBA 0.2 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂7 mg·L-1+椰汁10 mL·L-1，增殖倍数为2.39;原球茎最佳分化培养基为MS+6-BA 0.1 mg·L-1+NAA 0.05 mg·L-1+IBA 0.05 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂7 mg·L-1+椰汁20 mL·L-1，苗整齐健壮，叶片大而浓绿;最佳壮苗生根培养基为MS+IBA 0.2 mg·L-1+NAA 0.3 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂7 mg·L-1+土豆汁50 mL·L-1+活性炭1 g·L-1，生根率为100%。

关键词 大花惠兰;组织培养;优化

中图分类号：S682.31 文献标志码：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2020.30.074

大花惠兰花姿优美、花色艳丽、花期长久，在国际花卉市场上非常畅销，也是我国栽培较多的洋兰种类。大花惠兰的常规繁殖方法为分株繁殖，但3年左右才能分株出1株苗，繁殖速度极慢，完全不能满足花卉市场的需求。组织培养是大花惠兰快速繁殖的有效途径[1]。

1 材料与方法

1.1 材料

大花惠兰原球茎。

1.2 培养条件

培养室温度23～27 ℃，光照时间14 h·d-1，光照强度2 000 lx[2]。

1.3 方法

将200个大花惠兰原球茎接种在3种增殖培养基上，40 d时统计增殖数并计算增殖率，筛选出最佳增殖培养基。将原球茎在最佳增殖培养基上增殖5代后转接到3种分化培养基中，40 d时记录分化率并观察分化情况。选取高1 cm以上、长势较一致的小苗，转入3种壮苗生根培养基中，60 d后观察统计瓶苗的生长状况、生根率和平均生根数[3]。

原球茎增殖培养基配方为：1）MS+6-BA 3 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+IBA 0.2 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂7 mg·L-1+椰汁10 mL·L-1;2）6-BA 2 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+IBA 0.2 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂7 mg·L-1+椰汁10 mL·L-1;

3）6-BA 1mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1+IBA 0.2 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂7 mg·L-1+椰汁10 mL·L-1。原球茎的分化培养基配方为：1）MS+6-BA 1 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1+IBA 0.1 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+7 mg·L-1+椰汁20 mL·L-1;2）MS+6-BA 0.3 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1+IBA 0.05 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂7 mg·L-1+椰汁20 mL·L-1;3）MS+6-BA 0.1 mg·L-1+NAA 0.05 mg·L-1+IBA 0.05 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂7 mg·L-1+椰汁20 mL·L-1。

壮苗生根培养基配方为：1）MS+IBA 0.5 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂7 mg·L-1+土豆汁50 mL·L-1+活性炭1 g·L-1;2）MS+IBA 0.2 mg·L-1+NAA 0.3 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂7 mg·L-1+土豆汁50 mL·L-1+活性炭1 g·L-1;3）MS+IBA 0.1 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂7 mg·L-1+土豆汁50 mL·L-1+活性炭1 g·L-1。

2 结果与分析

2.1 大花蕙兰原球茎的增殖培养

表1为不同培养基配方对大花蕙兰原球茎增殖的影响。1号增殖培养基增殖倍数高，但原球茎呈淡绿色，有30%左右出现玻璃化现象，在分化培养中分化率不高（见图1）。2号和3号培养基中原球茎呈墨绿色，原球茎直径大，生长速度较快。2号和3号培养基既可以增殖，也能在培养70 d后开始分化成苗。

研究结果表明：增殖培养基为6-BA 2 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+IBA 0.2 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂7 mg·L-1+椰汁10 mL·L-1效果最好，增殖倍数为2.39。

2.2 大花蕙兰原球茎的分化培养

原球茎增殖培养5代后进行分化培养。3种分化培养基都能分化出苗（见图2）。1号和2号培养基既能使原球茎增殖，也能诱导分化，但原球茎增殖数大于分化数，苗瘦弱，常有玻璃化苗。3号培养基（MS+6-BA 0.1 mg·L-1+NAA 0.05 mg·L-1+IBA 0.05 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂7 mg·L-1+椰汁20 mL·L-1）成苗率可达90%以上，原球茎基本不增殖，且苗健壮整齐，为最佳培养基。

2.3 大花蕙兰的壮苗生根

表2为3种培养基配方对大花蕙兰壮苗生根的影响。表2结果表明：3种壮苗生根培养基均能使大花蕙兰试管苗生根，且生根率达100%，说明大花蕙兰容易生根。

1号培养基中大花蕙兰植株生长缓慢，节间较短，分析认为可能是生长素浓度偏高，抑制了植物的生长。2号和

3号培养基生长迅速，植株粗壮，根粗壮（见图3）。在2号和3号培养基中培养20 d 左右，试管苗开始生根，30 d左右长出3～4条长约1.5 cm、粗约0.15 cm的白色肉质根（见图4）。考虑移栽成活率，选择低浓度的配方MS+IBA 0.1 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂7 mg·L-1+土豆汁50 mL·L-1+活性炭1 g·L-1为最佳壮苗生根培养基。

3 结论

大花蕙兰原球茎增殖培养中，细胞分裂素浓度较高时，增殖系数高，但苗易玻璃化[4-5]。随着继代次数的增加，玻璃化现象日益严重，分析其原因为6-BA在继代中会逐渐累积，故生产中应在增殖培养中逐步降低6-BA的含量，以减免原球茎出现玻璃化现象。生根培养基中植物激素浓度低可以提高移栽成活率，但培养時间会较长，要特别注意环境污染。生根培养基中添加10%的土豆汁和红薯汁，试管苗生长更健壮。

参考文献：

[1] 刘洋，王玉英，李枝林，等.大花蕙兰‘红酒×莲瓣兰‘边草素花杂交种组培快繁技术[J].广西植物，2019（10）：1327-1333.

[2] 蔡寅川，李懿.天竺葵组织培养研究进展[J].福建农业科技，2015（3）：53-56.

[3] 胡松梅.铁皮石斛抗寒品种的快速繁殖[J].天津农业科学，2015（12）：114-116.

[4] 宋莲，王玉英，张宇欢，等.墨兰绿墨素与大花蕙兰世界和平杂交种组培快繁技术[J].江苏农业科学，2017（24）：41-43.

[5] 黎霞，曹桦，闻永慧，等.大花蕙兰与朱砂兰杂种根状茎增殖和分化的研究[J].中国农业科技导报，2017（2）：28-34.

（责任编辑：刘 昀）