蒋成辉 曾巧英 王萌 潘阳阳 刘旭明 尚天甜

（甘肃农业大学动物医学院，兰州 730070）

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种重要的病原菌，可引起人和动物化脓感染、肺炎、肠炎、心内膜炎、败血症及脓毒症等［1-2］。近年来由于抗生素的滥用，导致金黄色葡萄球菌耐药性产生，以耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）最为常见，由此导致的疾病逐渐增多，治疗效果越来越不显著。因此，迫切需要寻找新的抗金黄色葡萄球菌的药物靶点和策略来控制病原菌的感染。表面蛋白是革兰氏阳性菌的一种重要毒力因子，在细胞粘附、生物被膜形成、抵抗吞噬及入侵宿主细胞等方面发挥着重要的作用［3］。分选酶（srt）广泛的存在于革兰氏阳性菌中，它可将携带有LPXTG基序分选信号的表面蛋白锚定到细菌细胞壁肽聚糖上。金黄色葡萄球菌分选酶A（srtA）是细菌将表面致病性蛋白锚定到细胞壁上的关键酶［4］。研究表明通过抑制金黄色葡萄球菌Newman菌株srtA基因可降低金黄色葡萄球菌对机体的感染能力［5］。因此srtA是一个有潜在应用价值的药物治疗靶标［6］。

CRISPR/Cas9（Clustered regulatory interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9）是一种编辑效率较高的新型基因组靶向修饰技术。该技术仅通过一段sgRNA来识别靶位点，利用Cas9蛋白进行切割，产生双链DNA断裂（Double-strand breaks，DSBs），真核生物可通过非同源末端连接（Non-homologous end joining，NHEJ）修复方式和同源重组方式（Homology-directed repair，HDR）进行自我修复从而达到高效的基因编辑效果，目前应用已趋于成熟。原核生物除变形菌门、厚壁菌门、放线菌门等少数菌外，大多数细菌中并没有非同源重组修复机制，因此，CRISPR/Cas9系统在原核生物中运用并不广泛［7-10］。……