王 姣， 田元元， 梁志军

1 海南省人民医院， 海南医学院附属海南医院 a. 感染科； b. 消化内科， 海口 570311；2 博鳌超级医院 感染科， 海南 琼海 571435

直接抗病毒药物(DAA)的问世使慢性丙型肝炎的治疗进入了治愈的时代，但HCV感染慢性化机制尚未完全阐明。辅助性T淋巴细胞9(Th9)是新鉴定的CD4+T淋巴细胞亚群，主要分泌IL-9，PU.1和Foxo1是诱导Th9分化的特异性转录因子[1-2]。Th9在病毒感染中发挥重要的免疫调控作用[3]，但Th9及其分泌的IL-9在HCV感染中的作用尚未完全阐明。因此，本研究分析了慢性丙型肝炎患者Th9水平及其与相关临床指标的关系，观察抗病毒对慢性丙型肝炎患者Th9水平的影响。

1 资料与方法

1.1 研究对象 选取2018年12月-2019年7月于海南省人民医院就诊的慢性丙型肝炎初治患者。入组标准：(1)年龄>18岁且<65岁；(2)HCV RNA和抗-HCV阳性6个月以上；(3)入组前未使用抗病毒或免疫调节剂治疗。排除标准：(1)经影像学(腹部B超、肝纤维化扫描、CT或MRI)和相关实验室检查综合评估诊断为肝硬化；(2)合并其他嗜肝病毒和(或)HIV感染；(3)合并恶性肿瘤；(4)合并心脏、肺、肝脏、肾脏等重要脏器功能不全；(5)合并自身免疫性疾病；(6)孕妇及哺乳期妇女。所有入组患者均接受索磷布韦维帕他韦片(每片含有索磷布韦400 mg和维帕他韦100 mg，吉列德科学公司)1片/d口服治疗，疗程12周。同时，选取同期本院进行健康体检的健康志愿者作为对照组。

1.2 病毒学和生化检测 采用实时定量PCR法检测血清HCV RNA，试剂盒由中山大学达安基因公司提供，检测阈值为100拷贝/ml。采用日本Hitachi公司7170A全自动生化分析仪检测患者肝功能，ALT参考范围为男性12～40 U/L，女性11～35 U/L。

1.3 血浆和外周血单个核细胞(PBMC)的分离 慢性丙型肝炎患者基线和抗病毒治疗结束时分别采集EDTA抗凝外周血10 ml，室温1000 r/min离心10 min收集上层血浆，冻存于-80 ℃备用。下层血细胞使用美国Sigma公司的人淋巴细胞分离液、采用密度梯度离心法分离PBMC，调整细胞浓度至107个/ml，冻存于液氮中备用。

1.4 流式细胞术检测T淋巴细胞分泌IL-9水平 复苏冻存的PBMC，调整细胞浓度至106个/ml，加入佛波酯(50 ng/ml)和伊乌诺霉素(1 μg/ml)刺激细胞因子分泌，同时加入莫能霉素(10 μg/ml)抑制蛋白转运，刺激培养6 h后收集细胞。将……