杨鹏飞 杨成宇林 玲胡建慧周 莹孙小祥夏国华杨 欢*

（1.常州市金坛区人民医院，江苏常州 214000；2.江苏大学药学院，江苏镇江 212013；3.镇江市中医院，江苏镇江 212003）

僵蛹为蚕蛾科昆虫家蚕Bombyx moriL.的蛹接种白僵菌Beauveria bassiana发酵后的制品,常作为僵蚕的代用品,可用于治疗高热惊厥、癫痫、上呼吸道感染、流行性腮腺炎等,还具有抗凝、抗癌和其他药理作用［1］。

僵蚕（蛹）的应用广泛,需求量大,市面上出现了一些伪品,如感染绿僵菌Metarhizium anisopliae致死的家蚕和黑死蚕等［2］,对临床用药的安全性和有效性造成了负面影响。目前以僵蛹入药的临床常用中成药有天蚕胶囊和天蚕片,传统的性状与显微鉴别方法无法实现其中僵蛹成分的准确鉴定。DNA分子鉴定技术对不同物种具有高度特异性,比传统鉴定方法更为可靠［3］,近年来在中药鉴定领域备受关注。如DNA条形码技术,是利用DNA片段自身在物种种内的特异性和种间的多样性对物种进行鉴定［4-7］,结果准确度高,但是产物需要测序,操作步骤繁琐,尤其是不适用于混合物；而特异性引物扩增是根据基因序列存在的差异所设计的引物进行PCR,在样品检验过程中无需测序,可同时测定多个物种,且适用于混合物,弥补了DNA条形码技术的不足［8-9］。

本研究根据僵蛹中家蚕和白僵菌及其常见伪品绿僵菌的线粒体全基因（mtDNA）序列的差异设计引物,进而基于特异性引物扩增建立了具有较强专属性且能够简便快速地检测天蚕片和天蚕胶囊中僵蛹成分的技术,以期为市面中成药产品的质量控制提供参考。……