肿瘤浸润性淋巴细胞亚群的功能研究及其受体克隆
2020-11-24林晓为谢云青黄丽洁陈雪芳郑秋红
林晓为 谢云青 黄丽洁 陈雪芳 郑秋红
肿瘤浸润的淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocytes，TIL)指的是从肿瘤组织中分离出的浸润性淋巴细胞，在90年代中期由NIH的Rosenberg 发现的,并显示了良好的临床效果[1]，是国内外恶性肿瘤细胞免疫治疗的热点之一。寻找肿瘤特异的TIL细胞是提高TIL细胞临床有效率的关键，但是目前还没有特异的表面标志物。有研究显示，对肿瘤抗原起特异性免疫反应的T细胞克隆主要为CD8+效应性T细胞，且CD8+TIL细胞中PD-1+的细胞亚群比PD-1-的细胞亚群对肿瘤细胞的杀伤能力更强[2-3]。
Rosenberg 等利用外显子测序等手段得到可以识别新抗原的T 细胞的TCR序列后，将该TCR 导入到T 细胞中，大量克隆后进行抗肿瘤治疗，该方法可规避由于脱靶效应造成的毒副作用[4]。TCRα、β链基因的可变区(V) 各有3个互补决定区(complementarities determining region,CDR)，只有CDR3直接和抗原相互作用。TIL细胞的CDR3区受肿瘤抗原的长期编辑，其基因可能蕴含着丰富的个体化特异性抗原信息，且由于肿瘤抗原激活后的T细胞可得到优势扩增，因此TIL细胞中CDR3区的多样性较正常人明显降低，使利用CDR3区的基因突变信息寻找肿瘤突变的新抗原成为可能。
因此，本研究利用CD8、PD-1抗体分选出肿瘤组织来源的CD8+PD-1+TIL及CD8+PD-1-TIL细胞亚群，在体外对其特异性肿瘤杀伤功能进行验证比较。同时，为了获取肿瘤特异性的TCR信息，本研究尝试建立体外PCR扩增体系,扩增CD8+PD-1+TIL细胞的TCR CDR3区基因，为后续的TIL细胞TCR CDR3区基因测序，寻找个体化肿瘤突变新抗原信息奠定前期研究基础。
