牟大超 吴沙沙 缪治永 周 轶

早在18世纪末，Edward Jenner就将牛痘疫苗接种于婴幼儿体内，以达到预防天花的目的，开创了疫苗免疫的新纪元[1]。当今，肿瘤的免疫治疗已成为继手术治疗、放化疗后，最具前景的治疗手段[2]。肿瘤免疫疗法包括单克隆抗体治疗、免疫检查点抑制剂治疗(PD-1、CTAL-4等)、嵌合抗原受体T细胞治疗(CAR-T)、肿瘤疫苗等，部分已在临床应用，也不乏药物上市[3-9]。相对来说，肿瘤疫苗的发展比较缓慢，较为成功的当属预防人乳头状瘤病毒(papillomavirus，HPV)感染的宫颈癌疫苗(HPV)[10]。肿瘤疫苗包括全细胞肿瘤疫苗、树突细胞疫苗、多肽疫苗、核酸疫苗等[11-14]。肿瘤疫苗的发展缓慢究其原因可能与肿瘤特异性抗原的发现较难有关，针对肿瘤相关抗原所制备的疫苗在免疫保护中效果不佳[15]。

黑色素瘤是一种恶性程度较高的肿瘤，主要表现为皮肤色素痣的形态和颜色改变，可发生骨转移、肺转移等[16]。B16细胞是小鼠恶性黑色素瘤细胞系，B16细胞肿瘤疫苗的研发在国外有相关报道，但其保护效果存在争议，国内相关研究报道较少[17-19]。本文采用灭活方式，加以弗氏佐剂，制备B16肿瘤细胞疫苗。采用三针免疫程序，对C57小鼠进行免疫。第3次免疫后28天，对小鼠进行B16活细胞攻击，从而观察其保护效果。在第3次免疫后检测抗体滴度，在接受B16活细胞攻击后取小鼠脾脏，分析淋巴细胞CD4+T和CD8+T 细胞，从而判断疫苗的免疫效果。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 细胞与动物 B16黑色素瘤细胞由四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室杨寒朔教授惠赠，本室保种传代。……