曾 志 方 乐 赖婷婷 郭 梅 涂彩琼

1.福建省龙岩人民医院输血科，福建龙岩 364000；2.兵器工业五二一医院，陕西西安 710065

新生儿溶血病（hemolytic disease of the newborn，HDN）作为新生儿常见疾病之一，对于婴儿的健康具有重要的影响，若不能及时进行有效干预，则有可能导致新生儿神经细胞出现损伤，从而诱发胆红素脑病，最终造成新生儿生活质量的显著降低，不利于我国人民群众健康水平的有效控制。医务人员应提升血液检测技术水平，从而确保HDN的及时发现与治疗[1]。HDN传统的检测方法是采用试管检测法对新生儿血液进行检验，然而该方法检测步骤相对繁琐，检测流程耗时较长。同时，此方法在检测过程中受到的影响因素相对较多，无法保障检测工作的准确性。为了解决这一问题，本研究拟应用微柱凝胶技术对HDN患儿血液标本进行检测，与传统检测法比较分析微柱凝胶技术在HDN检测中的应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019年1～12月龙岩人民医院收治的1766例HDN患儿作为研究对象，所有患儿均存在不同程度高胆红素血症，间接胆红素（IBILI）水平208～250μmol/L，平 均（229.37±18.35）μmol/L；血清总胆红素（TBILI）水平250～291μmol/L，平均（269.21±16.74）μmol/L；其中男984例，女782例；患儿年龄7h～5d，平均（2.1±0.1）d。本研究获医院医学伦理委员会批准同意。

1.2 纳入及排除标准

纳入标准：（1）所有入选患儿均符合《新生儿高胆红素血症诊断和治疗专家共识》中的相关诊断标准[2]；（2）所有患儿生命体征平稳，意识清醒；（3）患儿家属知晓本研究内容，并签署知情同意书者。

排除标准：（1）合并先天性疾病者；（2）具有严重心、肝、肾等重要器官功能不全者；（3）合并感染性疾病者。

1.3 仪器与试剂

戴安娜全自动血型仪，大容量低速离心机KDC-1044L（安徽中科中佳科学仪器有限公司），新生儿ABO凝胶卡（戴安娜公司生产，DG GEL Newborn凝胶卡），抗人球蛋白卡（戴安娜公司生产，DG Gel Coombs卡），标准A、B、O型红细胞试剂（上海血液生物医药有限公司），抗人球蛋白试剂（上海血液生物医药有限公司）。

1.4 方法

1.4.1 微柱凝胶技术 主要检测步骤如下。采集患儿静脉EDTA抗凝血样2mL，3500rpm离心5min，分离血浆，将红细胞通过三洗红细胞进行红细胞悬液的制备，制备完成后，将其加入DG GEL Newborn凝胶卡（DIANA）中并进行离心，同时对患儿样本中血型及直接抗人球蛋白试验进行观察与记录。检测完毕后，将患儿血清与红细胞放散液分别加入标注A、B、O孔的抗人球凝胶卡（DIANA）中，随后将标准A、B、O型红细胞试剂对应滴入抗人球凝胶卡中（红细胞浓度用生理盐水稀释至1%左右），从而对患儿抗体放散与抗体游离情况进行分析与记录。

1.4.2 传统试管检测技术 主要检测方法如下。采用离心设备对患儿血液样本进行离心处理，同时通过0.85/0.9%氯化钠溶液对患儿血液样本中红细胞进行相应的清洗，以便实现悬液的有效配制。将制得的红细胞悬液与抗人球蛋白试剂加入到同一支试管中，两者的用量分别为1滴和2滴，随后对试管内试剂进行离心处理，记录抗人球蛋白的实验结果。对相关试管进行标记，随后向试管中加入红细胞试剂，然后加入上述离心处理后得到的患儿血清，完成后将试管在37℃的环境下进行静置孵育，孵育时间为1h。培养完毕后，使用氯化钠溶液对试管进行清洗处理，清洗完毕后加入抗人球蛋白试剂并进行离心，离心结束后，由检测人员对患儿抗体游离与抗体放散结果进行分析与记录。

1.5 观察指标及评价标准

本研究中，研究人员将患儿血液样本中抗体游离、抗体放散及直接抗人球蛋白的阳性检出率作为主要观察指标。新生儿溶血诊断标准：3项试验同为阳性可确诊，不同时为阳性时，以放散试验阳性为诊断标准，抗体游离和直接抗人球蛋白同时为阳性时可确诊，抗体游离或直接抗人球蛋白单项为阳性时为疑似。在微柱凝胶中，患儿红细胞抗原和抗体生产的复合物若分布在凝胶中或浮于凝胶表层，则判定其为阳性，若红细胞在凝胶管底部沉积或无特异性复合物生成则判定其为阴性。

1.6 统计学处理

应用统计学软件SPSS23.0对相关数据进行分析，计量资料以（）表示，采用t检验；计数资料以[n（%）]表示，采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血型血清学检测

1766例疑似新生儿溶血患儿中，母亲血型均为O型RhD阳性，疑似患儿A型血有891例，确诊178例，B型疑似患儿803例，确诊151例，O型血疑似患儿62例，确诊0例，AB型疑似患儿10例，确诊0例，总共确诊病例329例，见表1。

表1 1766例疑似新生儿溶血患儿血型血清学检测结果

2.2 三项试验检验结果

直接抗人球蛋白、抗体游离试验和抗体放散试验对1766例疑似新生儿溶血患儿标本检验结果的分布及对结果的判断，见表2。

2.3 两种检测方法比较

微柱凝胶技术抗体游离、抗体放散及直接抗人球蛋白的阳性检出率均高于传统试管技术，差异有统计学意义（P＜0.05），见表3。

3 讨论

新生儿溶血病（HDN）主要是由于胎儿在遗传过程中从父亲的基因中继承了部分母亲体内不具有的红细胞抗原，或母亲与婴儿血型不合所导致[3]。当胎儿红细胞通过脐带进入母亲体内后，母体中出现相应的免疫性抗体，此类抗体可经过脐带或胎盘对胎儿红细胞造成影响，从而导致胎儿出现水肿、黄疽、肝脏肿大以及贫血等不良情况，甚至可导致胎儿死亡，严重威胁新生儿健康[4]。为了保障胎儿健康，医务人员应积极做好新生儿溶血病的早期诊断工作，确保新生儿问题的及时发现与合理干预，从而降低患儿后遗症与不良情况的发生[5]。相关数据显示，现阶段在已知的血型系统中，最常见的HDN为ABO血型不合，多见于母体血液为O型，而新生儿血型为A型或B型[6]。据不完全统计，由于ABO血型不合而造成的新生儿溶血病患儿约占该病患儿总数的50%以上[7]。

表2 对1766标本三项试验检验结果分布及结果判断

表3 患儿阳性检出率情况[n（%）]

临床上长期以来主要采用试管检测的方式对新生儿溶血病进行检测，然而该方法在检测过程中需要对患儿血液样本中红细胞进行反复清洗，且涉及的检测步骤较为繁琐，检测过程中容易受到人为因素的影响，降低检测结果的准确性[8]。近年来，随着科学技术水平的不断提升，我国临床医疗检测技术得到了有效的发展与优化。随着微柱凝胶技术的出现与应用，有效解决了新生儿溶血病的检测效率与准确性的问题[9-10]。从检测原理上分析，该方法主要通过稀释液的应用，有效开展凝胶的配置工作，在配置过程中，当红细胞与抗体发生反应后，其反应所得到的复合物会在凝胶中聚集或漂浮于凝胶表面，便于检测人员肉眼观察检测结果[11-12]。若红细胞与抗体之间无结合，红细胞则会沉积在凝胶底部，即可判定患儿检测结果为阴性。同时，在微柱凝胶技术中通过抗人球蛋白试剂的合理应用，有利于进一步实现试验敏感度的提升。相关研究表明，在抗体放散实验中，该检测方法具有较强的敏感性[13]。然而，由于新生儿体内所具有的ABO抗原未实现完全发育，导致血液样本中抗原位点相对较少，难以有效实现凝集反应，从而导致检测过程中在直接抗人球蛋白中所表现出的阳性率相对低于其他两项试验的阳性指标[14]。因此，为了避免漏诊情况的出现，医务人员在进行诊断的过程中应合理对患儿血液样本的三项检验指标进行综合评价[15]。此外，为了避免由于样本抗凝效果不佳产生纤维蛋白干扰实验结果而出现假阳性的问题，检验人员应在检测前对标本质量严格把关。

本研究结果表明，在新生儿溶血病检测过程中，与传统试管检测方法比较，通过微柱凝胶技术的应用，可以提升患儿抗体游离、抗体放散以及直接抗人球蛋白的检测效率，从而在缩短了检测用时的同时实现了患者检测质量的提升与发展，这与Chen等[16]学者的研究结果相似。

综上所述，在临床过程中，通过微柱凝胶技术的应用，医务人员可以更为有效地对新生儿身体情况进行合理检测，从而对患儿是否患有新生儿溶血病进行准确的判定，对于新生儿健康的保障具有积极意义，值得在临床过程中进行大力推广与普及应用。