崔明

（濮阳市妇幼保健院 河南 濮阳 457000）

B 族溶血性链球菌（group B streptococcus,GBS）属于革兰阳性兼性厌氧球菌，在人体中多位于泌尿生殖道及消化道，是新生儿败血症、脑膜炎及肺炎等疾病的诱发因素，具有较高的死亡率［1］。在导致孕产妇和新生儿感染的致病菌中，GBS 是主要因素，其会造成妊娠晚期孕妇不良妊娠结局，危及母婴生存质量［2］。因此，为准确筛查GBS 感染，帮助孕妇在早期接受规范治疗，寻找一种高效的诊断方法尤为重要。目前细菌培养法是诊断GBS 感染的常用方法，但其培养周期长，且容易受到阴道内其他细菌影响而抑制GBS 生长，导致诊断结果准确率不高。实时聚合酶链反应（real-time polymerase chain reaction,real-time PCR）可用于直接快速检测，且具有较高的敏感性。本研究探讨妊娠晚期孕妇GBS 感染诊断中应用realtime PCR 法的价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018 年8 月至2019 年8 月在濮阳市妇幼保健院产检的380 例妊娠晚期孕妇。其中，GBS患者30 例，非GBS 患者350 例；年龄22～38 岁，平均（30.15±2.54） 岁；孕周35～37 周，平均（36.05±0.19）周。纳入标准：①单胎妊娠；②检查前1 周未使用阴道用药、抗生素等，且无性生活；③患者及其家属知情同意。排除标准：①黏液脓性宫颈炎、衣原体感染及滴虫性阴道炎等生殖道感染；②精神系统异常，且无正常认知、沟通能力；③不配合检查或中途退出。本研究通过医院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 采集标本 擦去产妇外阴分泌物，在阴道下1/3 部位插入2 支拭子，361°旋转1 周，收集阴道分泌物，置于无菌套管内送检；同时在肛门括约肌上2.5 cm 处插入2 根拭子，旋转后采集直肠分泌物，置于无菌套管内送检。

1.2.2 GBS 培养 在哥伦比亚血琼脂平板上分别接种阴道和直肠拭子，将孵育箱环境设置为5%的二氧化碳CO2、24～48 h 孵育。在血平皿上选取存在β 溶血菌落，实施CAMP 试验，采用VITEK 2 Compact 微生物鉴定系统（法国生物梅里埃股份有限公司），在维持约35℃温度下进行细菌培养与鉴定。

1.2.3 实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR） 检测 采用ABI 7500 型qRT-PCR 仪（美国应用生物系统公司）提取DNA，采用B 族链球菌核酸检测试剂盒进行检验。当2 种检测结果不一致时，阴性为培养结果，阳性为real-time PCR 检测结果，可进行重新培养确认；若阳性为培养结果，阴性为real-time PCR 检测结果，可经real-time PCR 法重新检测，以证实PCR 检测结果的准确性。

1.3 观察指标

①将real-time PCR 法联合细菌培养法的诊断结果作为GBS 感染诊断的金标准，比较2 种诊断方法阳性检出情况。②分析2 种诊断方法的敏感性、特异性和准确性。

1.4 统计学方法

数据分析采用SPSS 23.0 统计软件。计量资料以均数±标准差（）表示，比较用t检验；计数资料以率（%）表示，比较用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 real-time PCR 法与细菌培养法诊断结果情况

380 例妊娠晚期孕妇中，经real-time PCR 法联合细菌培养法诊断有30 例GBS 感染者，阳性率为7.89%；real-time PCR 法诊断有29 例GBS 感染者，阳性率为7.63%；细菌培养法诊断有9 例GBS 感染者，阳性率为2.37%。real-time PCR 法阳性检出率高于细菌培养法，差异有统计学意义（P<0.05）。

2.2 real-time PCR 法与细菌培养法的诊断效能

real-time PCR 法检测的敏感性、特异性和准确性较细菌培养法高，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

表1 real-time PCR 法与细菌培养法的诊断效能 （%）

3 讨论

GBS 作为一种条件致病菌，多存在于女性生殖道内，带菌率可达30%，孕妇、新生儿等特殊人群是其感染的高危人群。因妊娠期孕妇免疫功能较低，阴道酸碱值改变，体内糖原含量增加，且具有较高的孕激素和雌激素水平，容易造成阴道菌群失调，促使GBS 繁殖。孕妇感染GBS 后，容易造成产后子宫内膜炎、败血症、宫内感染、绒膜羊膜炎、流产及胎膜早破等；同时会经产道垂直传播或胎儿呼吸道传播，导致新生儿感染，危及母婴生命安全［3］。

目前，GBS 感染诊断方法包括细菌培养、PCR及核酸探测检测等，其中检测的金标准为细菌培养法，但其检测难度高，且检测时间长达24～48 h、耗时长，不适用于未行正规产检、早产及胎膜早破的孕妇，容易因长时间检测而错过最佳的用药时机，导致新生儿感染风险增加；同时该检测结果的准确性容易受到多种因素的影响，直肠或阴道内其他微生物的存在会抑制GBS 生长，且采样后标本储存的温度、条件等也会导致结果误差［4-5］。研究发现，在孕产妇分娩前4 h 给予抗生素治疗，可较好地保护新生儿免受GBS 感染，因此为帮助妊娠晚期孕妇快速确诊GBS 感染，选择的检测方法需具备结果直观、操作便捷及培养时间短等特点，以提高母婴的生存质量［5］。

本研究结果显示，real-time PCR 法阳性检出率较细菌培养法高，其检测的敏感性、特异性和准确性均较细菌培养法高，表明在妊娠晚期孕妇GBS 感染诊断中应用real-time PCR 法具有较高的价值，诊断的敏感性、特异性和准确性高，可为病情诊断、预后评估提供可靠依据。real-time PCR技术是一种高效、快速检验的方法，可定量检出GBS，且检测时间较短，检测结果可在提取标本后2～4 h 获取，易于批量操作；同时对于死亡的GBS也可检测出，便于GBS 感染者早期接受治疗，筛查方法可满足产前和产时的要求［6-7］。而细菌培养法在诊断部分GBS 感染孕妇时，因β 溶血环的缺乏而出现阴性误判，需采用qRT-PCR 定性。因此，相较于细菌培养法，real-time PCR 法更具优势，检测结果可靠性、准确性较高，且快速简便，可为GBS 感染早期确诊治疗提供参考依据，具有较高的临床应用前景和价值［8］。而在临床实际检测中，需严格规范检验操作流程，加强质量控制，在采集、保存及运输等环节严格把控，以减少其他因素干扰而影响检测结果，降低诊断的误诊率及漏诊率。此外，针对感染GBS 的孕妇，通过及时有效的治疗手段，可较好地提高新生儿生存质量，降低因GBS 感染而导致的死亡，临床需加强对携带GBS 孕妇的重视程度，避免不良妊娠结局。

综上所述，在妊娠晚期孕妇GBS 感染诊断中应用real-time PCR 法的诊断效能高，可为临床诊疗提供可靠依据。