毕静 白晓雪 刘方方

(1湖北省阳新县人民医院心内科，湖北 阳新 435200;2吉林大学第一医院干部病房;3吉林市中心医院神经内科)

动脉粥样硬化(AS)是一种慢性进行性疾病，特征在于脂质和纤维成分的积累和沉积及导致病变发展的炎症反应〔1〕。高脂血症、高血糖症、高血压和炎症引起血管内皮细胞损伤后，大中型动脉的内膜内会发生病变。AS病变发展的最早临床标志是充满脂质的巨噬细胞(称为泡沫细胞)聚集，形成“脂肪条纹”。微小RNA(miRNA)是哺乳动物内源性高度保守的短链非编码RNA，与炎症、肿瘤、干细胞分化等多种生命进程有着密切的联系，正在成为多种疾病重要的临床生物标志物和治疗的靶标〔2〕。本研究探讨血浆miR-144-5p在AS诊断中临床意义。

1 资料与方法

1.1研究对象 吉林市中心医院募集2015～2019年84例无症状AS患者和72名健康对照者，均无吸烟史。根据欧洲高血压学会和欧洲心脏病学会的动脉高血压管理工作组发布的2007年动脉高血压管理指南诊断无症状AS。排除心血管和脑血管疾病、糖尿病、肿瘤、风湿免疫性疾病、急性感染疾病或药物治疗史。所有受试者血浆总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和C反应蛋白(CRP)由吉林市中心医院检验科提供，另抽取空腹静脉血5 ml，离心后留取血浆。

1.2主要试剂和仪器 qRT-PCR仪(Biorad，美国)，逆转录试剂盒和sybrgreen mix(全式金，中国)。

1.3血浆miRNA提取 新鲜抽取抗凝血经短暂离心后，取400 μl血浆加入200 μl三氯甲烷，在室温下孵育10 min。样品以14 000 r/min离心15 min，分离出上层水相，并加入500 μl异丙醇，然后在室温下孵育15 min。温育后，将样品再次离心以沉淀总RNA。将沉淀完全干燥并溶于无RNA酶的纯水中。使用Nanodrop测量RNA浓度后保存于-80℃待用。

1.4qRT-PCR检测血浆miR-144-5p水平 使用逆转录试剂盒对样品中的总RNA进行逆转录。取逆转录产物加入引物、SYBR mix、脱氧核糖核酸(dNTP)和水进行qPCR。使用U6作为定量miR-144-5p水平的内参，通过公式2-ΔΔCT确定相对miRNA表达水平。

1.5统计学分析 采用SPSS15.0软件进行t检验，Spearman相关分析。

2 结 果

2.1一般资料 两组年龄和性别构成上无明显差异，体重指数(BMI)、总胆固醇、三酰甘油、HDL-C、LDL-C、心率和血压无显著差异(均P>0.05)。与对照组相比，AS组CRP水平显著升高(P<0.05)。见表1。

表1 两组一般资料

2.2血浆miR-144-5p水平 与对照组(1.12±0.37)相比，AS组血浆中miR-144-5p表达(3.24±0.51)明显增高(P<0.001)。

2.3血浆miR-144-5p水平与血脂和CRP的相关性 AS患者血浆miR-144-5p水平与外周血中总胆固醇、三酰甘油、HDL-C和LDL-C水平无明显相关性(P>0.05)，但与CRP呈正相关(r=0.625，P<0.01)。

2.4miR-144-5p用于AS诊断的敏感性和特异性 受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)为0.82，可作为诊断AS风险的潜在生物标记。miR-144-5p检测AS的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和优势比分别为78.6%，83.2%，74.0%，84.3%和11.7%。

3 讨 论

miRNA在许多生理和病理生理过程中广泛发挥功能，例如胚胎发育、干细胞分化、炎症和肿瘤〔3〕。研究表明，miRNA可以用作包括AS在内的各种人类疾病的诊断标记〔2〕。既往发现，miR-144-3p可以作为疾病中的有效生物标志物。例如，Satoh等人报道称，与健康人相比，阿尔茨海默氏病患者血液样本中miR-144-5p和其他26种miRNA的表达失调，这可能与神经元突触功能有关〔4〕。与健康对照组相比，抑郁/焦虑症患者的血浆miR-144-5p水平显著降低，并且与抑郁评分呈负相关〔5〕。在各种类型的肿瘤中也发现了异常的miR-144-5p表达〔6～8〕。本研究表明，miR-144-5p在AS的发病机制中可能起着非常重要的作用。

AS被认为是由炎症反应驱动的多因素疾病，炎症反应在急性AS血栓形成事件的发生中也起到了重要的促进作用〔9〕。CRP是一种急性期蛋白，其在血清中的浓度反映了机体的系统性炎症状态。既往研究发现，CRP水平与心血管疾病密切相关，并可作为预测心肌梗死和脑卒中的可靠标志物〔10〕。CRP可能会促进AS斑块的进展和(或)不稳定〔11〕。本研究表明miR-144-5p可以用来反映AS患者系统性炎症的严重程度，可以作为监测AS病情变化或进展的潜在性标志物。