何洋洋，王力刚，赵玉驰

（1.南华大学附属邵阳医院 骨科，湖南 邵阳 422000；2.深圳市盐田区人民医院骨科，广东 深圳 518000）

骨质疏松症被定义为全身性、进行性骨骼疾病，其特点是骨形成与骨吸收之间的不平衡引起骨强度下降从而导致骨折风险增加。骨质疏松的治疗以药物治疗为主，根据具体治疗机制的不同，可大致分为基础补充剂、减少骨吸收剂及促进骨合成剂。近年来，人们一直探索着治疗骨质疏松的新途径，其中就包括对SOST基因的研究。SOST基因位于人类基因组的17q12-21 染色体中，其编码的骨硬化蛋白通过影响Wnt/β-catenin 信号途径对成骨细胞的骨形成起抑制作用[1]。有研究发现，肌细胞增强因子2C（myocyte enhancer factors 2C, MEF2C）是SOST基因的远端增强子ECR5 依赖性SOST 表达的主要转录调节因子[2]。并且发现MEF2C敲除小鼠表达SOST，且进行性降低了40%～70%，相比对照组小鼠骨密度增加[3]。这说明MEF2C基因是骨细胞表达骨硬化蛋白所必需的。反义长链非编码RNA（long non-coding RNA, lncRNA）作为内源性RNA，与其他转录物序列互补，可在转录及转录后水平调控靶基因的表达[4]。反义基因MEF2C-AS1与正义基因MEF2C的5'UTR 区域重叠，这意味着lncRNA MEF2C-AS1 可能在MEF2C 表达和/或翻译中起作用[5]。因此本研究拟通过成骨细胞实验，观察MEF2C-AS1 对MEF2C、SOST 的作用，揭露其对骨量的潜在作用。

1 材料与方法

1.1 细胞系及培养

人成骨细胞系hFOB1.19 购自美国ATCC 菌种保藏管理中心，采用DMEM/F12 培养基+10%FBS+0.3 mg/ml G418+1%青霉素-链霉素混合溶液，于34℃、5%二氧化碳及90%相对湿度的培养箱中培养。利用人成骨细胞系分别转染pcDNA3.1a（对照组）、pcDNA3.1a-MEF2C-AS1（过表达MEF2C-AS1组）、Smart Silencer 阴性对照（阴性对照组）、lncRNA MEF2C-AS1 Smart Silencer（沉 默MEF2C-AS1 组）、pcDNA3.1a-MEF2C（过表达MEF2C 组）、pcDNA3.1a-MEF2C-AS1+pcDNA3.1a-MEF2C（ 过 表 达MEF2CAS1+MEF2C 组）。……