朱理辉，罗勇，邓萍萍，陈宏辉，陈汶，李国庆，王正根，张琍

（南华大学附属第二医院 1.消化内科，2.重症医学科，湖南 衡阳 421001）

胃癌是我国常见的消化道恶性肿瘤之一，大多数患者就诊时为中晚期，无手术治疗机会，目前中晚期胃癌的治疗主要采用以化疗为主的综合治疗[1]。白藜芦醇又称为芪三酚属天然多酚类化合物，是药食作物（如桑椹、虎杖、葡萄、花生等）的主要成分，具有很强的抗氧化活性[2]，属于植物源性药物，具有毒副作用少和植物衍生成分广泛靶标的特点。其在抗肿瘤治疗中的作用已有许多研究，包括结肠癌、皮肤恶性黑色素瘤、子宫内膜癌等[3-5]，但其对胃癌细胞增殖的影响及相关作用机制尚不清楚。本研究通过观察不同浓度白藜芦醇对胃癌细胞株MKN45 增殖及丝裂原活化蛋白激酶（MEK）/细胞外信号调节激酶（ERK）信号通路相关蛋白表达的影响，为临床治疗及新药研发提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

胃癌细胞株MKN45（中国科学科院上海细胞研究所），白藜芦醇和PD98059（美国Sigma Aldrich 公司），四甲基偶氮唑蓝（MTT）检测试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司），胎牛血清及RPMI 1640 培养基（美国Hyclone 公司），二甲亚砜（DMSO）（中国医药集团有限公司），胰蛋白酶（美国Sigma Aldrich 公司），兔抗Ras 及Raf 一抗（美国Cell Signaling 公司），兔抗MEK 及ERK1/2 一抗（美国Santa Cruz 公司），二氧化碳CO2恒温培养箱（上海新苗医疗器械制造有限公司），超净工作台（江苏苏净集团有限公司），荧光显微镜（德国莱卡公司），低温高速离心机（美国贝克曼库尔特公司），凝胶成像仪（美国Bio Rad 公司）。

1.2 实验方法

1.2.1 细胞培养人胃癌MKN45 细胞为贴壁生长细胞，常规培养于含10%小牛血清、100 u/ml 青霉素的RPMI 1640 培养基，置于37℃、5% CO2培养箱内培养。……