蔡冰洁，熊晓庆

（1.武汉大学人民医院 检验科，湖北 武汉430060；2.海南医学院 热带医学与检验医学院，海南 海口 571199）

目前基因检测的方法主要有PCR、液态生物芯 片、基因芯片、微流控技术等，这些传统的检测方法有一些较明显的缺陷，如操作繁琐、易污染、耗时耗力、成本高等[1-4]。量子点是一种新型半导体纳米材料，尺寸2 ～10 nm，是一种较传统荧光染料更优良的荧光探针[5-7]。流式微球技术是在流式细胞术的基础上新建的一种技术。其作用机制是通过携带有荧光信号的微球与待测物结合在一起形成一个可以发荧光的复合物，然后通过检测其平均荧光强度反映待测物的浓度[8]。流式细胞仪可以对细胞水平之外的分子水平进行检测[9-10]。为建立一种高通量、操作简单、成本低的快速检测方法，本文拟利用新型纳米材料量子点流式微球技术检测DNA，该新型方法结合量子点优异的荧光特性和流式微球技术的高通量，具有反应灵敏快速、操作简单等优势，利用微球-DNA-量子点夹心结构，通过检测核酸杂交前后荧光强度的变化来实现DNA 的高通量快速检测。该新型技术有望实现临床疾病相关核酸分子的快速检测。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

量子点购自武汉珈源量子点技术开发有限公司，链霉亲和素包被的微球购自武汉珈源生物医学工程有限公司，3-二甲基氨基丙基-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）、N-羟基丁二酰亚胺（NHS）、生物素琥珀酰亚胺酯（生物素-NHS）购自美国Sigma Aldrich 公司，DNA 序列购自宝生生物工程（大连）有限公司（见表1），通过高效液相纯化，并用1×磷酸盐缓冲液（PBS）稀释，其余试剂购自上海捷瑞生物有限公司。……