马 杰，丁 野，方 磊△，李瑞莲，王湘波

（1. 湖南省药品检验研究院，湖南 长沙 410001； 2. 湖南省药品质量评价工程技术中心，湖南 长沙 410001）

土牛膝为苋科植物粗毛牛膝Achyranthes aspera L.的干燥根及根茎［1］，主产于湖南、江西、江苏、广东、广西、四川、云南、贵州等地，以野生为主，具有疗伤止痛、补肾强骨、外用消风祛斑的功效，用于治疗咽喉肿痛、高血压、月经不调、闭经、风湿痹痛、腰膝酸痛、跌打损伤、尿路结石、肾炎、扁桃体炎等［2］。东梅止咳颗粒、喉咽清口服液、喉咽清颗粒、复方无花果含片、金乌骨通胶囊等均含有土牛膝药材，其中咽清口服液和喉咽清颗粒为2010 年《湖南省基本医疗保险、工伤保险、生育保险药品》《湖南省新型农村合作医疗的基本药品》纳入品种，并增入2017 年国家医保目录［3］。微量元素是植物生长发育必需的营养元素，在促进作物生长代谢、提高产量品质方面有十分重要的作用。中药的疗效不仅与其活性成分有关，且与微量元素的种类和含量也密切相关［4］。为了考察土牛膝中代表性微量元素的含量，并了解各元素间含量的相关性，本研究中建立了测定10 批湖南产土牛膝中13 种微量元素［铝（Al），硼（B），钡（Ba），铍（Be），铜（Cu），铁（Fe），锂（Li），镁（Mg），锰（Mn），锶（Sr），钛（Ti），钒（V），锌（Zn）］含量的微波消解结合电感耦合等离子体发射光谱（ICP-OES）法。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

ICPE-9000 型电感耦合等离子体原子发射光谱仪（日本岛津公司）；MARS 6 CLASSIC 型微波消解仪（美国培安科技公司）；BHW-09C 型控温电加热器（上海博通化学科技有限公司）；AE200 型电子分析天平（德国梅特勒-托利多公司，精度为十万分之一）。

1.2 试药

Al，B，Ba，Be，Cu，Fe，Li，Mg，Mn，Sr，Ti，V，Zn 对照品溶液（国家有色金属及电子材料分析测试中心），离子质量浓度均为100 μg/mL；HNO3（优级纯）；水为娃哈哈纯净水；10 批土牛膝药材均采自湖南省土牛膝的主产地湖南省永州市，经湖南省药品检验研究院丁野主任中药师鉴定为正品，详见表1。

2 方法与结果

2.1 ICPE-9000 工作条件

氩气气压：465.30 MPa；功率：1.2 kW；等离子体流量：10.00 L/min；辅助气流量：0.60 L/min；载气流量：0.70 L/min；观测方向：Axial；位置：Low；泵速：20 r/min；仪器稳定延时：15 s；溶剂清洗：30 s；样品清洗：90 s；灵敏度模式：宽范围；曝光时间：30 s。

2.2 样品预处理[5 -8]

取样品粗粉约0.5 g，置微波消解罐中，加入8 mL HNO3，加盖密封，静置过夜，放入微波消解炉中消解。消解完毕后，设置赶酸仪的温度为120 ℃，赶酸2～3 h，至溶液剩余2～3 mL，转移至50 mL 容量瓶中，加2%HNO3溶液稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。同法制备空白样品溶液。

2.3 测定波长选择

各元素分析谱线根据元素的谱线特征、元素间的干扰情况及仪器对该种元素的检测灵敏度确定。选择发射净强度大、信噪比高、背景低、共存元素干扰少、强度匹配的谱线为待测元素的分析谱线。最终，选择分析谱线的 最 优 波 长 为394.403 nm（Al）、182.640 nm（B）、233.527 nm（Ba）、234.861 nm（Be）、327.396 nm（Cu）、239.562 nm（Fe）、610.363 nm（Li）、383.826 nm（Mg）、260.569 nm（Mn）、216.596 nm（Sr）、337.280 nm（Ti）、292.402 nm（V）、206.200 nm（Zn）。

2.4 方法学考察

线性关系考察：按拟订条件依次测定各微量元素的系列质量浓度的对照品溶液，以对照品质量浓度（X）为横坐标、峰强度（Y）为纵坐标进行线性回归，得各元素的回归方程。详见表2。

检测限确定：按拟订条件，取空白样品溶液连续进样11 次测定，以3 倍空白溶液的标准偏差所对应的质量浓度作为仪器的检测限。结果见表2，各元素的检测限均低于2 mg/kg，灵敏度较高，可满足分析要求。

精密度试验：取混合对照品溶液，按拟订工作条件连续进样6 次。结果各微量元素含量的RSD 为0.20%～2.49%（ n=6），表明仪器精密度良好。

重复性试验：对同一批（编号5）土牛膝样品，依法制备供试品溶液6 份，分别进样测定。结果各元素含量的RSD 为0.11%～3.86%（n=6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：取样品（编号5），依法制备供试品溶液。加入各待测元素（Al，B，Ba，Be，Cu，Fe，Li，Mg，Mn，Sr，Ti，V，Zn）对照品溶液（Al，Fe 100 μg；Mg 1 000 μg；Ba，Be，Cu，Li，Ti，V 1 μg；B，Mn，Sr，Zn 10 μg，均水浴蒸干后取样），按2.2 项下方法消解，依法测定。结果见表2。

2.5 样品含量测定

取10 批样品，粉碎，得粗粉，依法制备供试品溶液。测定Al，Mg，Fe，Mn，Zn 前 将供试品溶液稀释后再进样，以满足线性范围要求。按拟订条件进行测定，结果见表3。有2批未检出Cd 和Ni，其余元素均有不同程度检出。

2.6 元素间相关性分析

采用SPSS 19.0 统计学软件进行相关性分析，因多数变量不服从正态分布，采用Spearman 等级相关系数法。结果见表4。

表3 13 种微量元素含量测定结果（mg/kg，n=3）

表4 13 种微量元素相关性分析

3 讨论

本研究中建立的同时测定土牛膝13 种元素含量的微波消解-ICP-OES 法，能快速、准确地测定土牛膝中13 种微量元素，线性范围广，方法学考察结果均能满足检测要求。

土牛膝中含量较高的为Al，Fe，Mg，Mn，Zn，占13种元素总量的96.24%～98.35%，土牛膝的疗效可能与以上元素相关；其中，Mg 含量最高（699～4 770 mg/kg），占13 种微量元素总量的34.9%～64.2%。

元素含量间有Al-Ba，Al-Mg，Al-Sr，Fe-Sr，Fe-Mg，Cu-Mg，Sr-Mg 等25 对呈显著正相关，表明土牛膝生长过程中，25 对元素吸收积累的协同作用较好；Al-Be，B-Be，Li-Zn 等8 对呈显著负相关，表明土牛膝在生长过程中此8 对元素的吸收积累的拮抗作用较强。