程 媛，唐 裕，唐 熠，李 涓，谭亿民，盛 蓉

（成都中医药大学附属医院，四川 成都 610072）

1 材料与方法

1.1 材料

仪器：BASIC 70VB 0370 型半自动生化分析仪（法国Secoman 公司）；OLYMPUS CKX41 型倒置显微镜（日本奥林巴斯公司）；P200 型F123061 微量移液器（法国Gilson 公司）；GSV-DA-1 型隔水式电热恒温培养箱（湖北省黄石市医疗器械厂）。

动物：日本大耳白实验兔，体质量1.8～2.2 kg，雌雄不拘，由四川省实验动物专委会养殖场提供，普通级，许可证号为SCXK（川）2013-14。昆明种小鼠，体质量18～22 g，雌雄各半，由成都中医药大学实验动物中心提供，SPF 级，许可证号为SCXK（川）2014-11。饲养观察室温度22～24 ℃，相对湿度65%～75%。本实验经医院试验动物伦理委员会审批。

菌株、病毒株、细胞株：金黄色葡萄球菌（ATCC25923），甲型链球菌，乙型溶血性链球菌和肺炎链球菌，肺炎克雷伯菌，呼吸道合胞病毒（RSV），人喉癌上皮（Hep-2）细胞，均由四川大学基础医学与法医学院微生物学教研室保存和提供。置于含10%胎牛血清的DMEM 培养液，在37 ℃及5%CO2培养箱中培养，每2～3 d 传代1 次。1.2 方法

内毒素致家兔发热模型实验：选择基础体温在38.9～39.9 ℃范围内的家兔50 只，将其随机分为5 组，每组10 只，分别为感合剂高、中、低剂量组（每1 kg体质量分别含14.8，7.4，3.7 g 生药），阿司匹林组（0.15 g/kg）和模型组。感合剂高、中、低剂量组分别为临床用药剂量的10，5，2.5 倍。试验当天各组以4 mL/kg灌胃给药1 次，给药0.5 h 后，耳缘静脉注射细菌内毒素1 μg/kg，并于1，2，3，4，5，6 h 时测定各组家兔体温升高值，以体温升高值为纵坐标，时间为横坐标，绘制家兔发热体温曲线图，详见图1。以体温反应指数（TRI）表示体温曲线与基线间的面积值，n 小时的TRI 表示为TRIn。

小鼠体内碳粒廓清实验：将60 只昆明种小鼠按体质量和性别随机分为5 组，每组12 只，分别为感合剂高、中、低剂量组（每1 kg 分别含35.52，17.76，8.88 g生药），甘露聚糖肽组（0.02 g/kg）和正常对照组。感合剂高、中、低剂量组分别为临床用药剂量的24，12，6 倍。每天灌胃给药1 次，给药容量为每10 g 体质量0.2 mL，正常对照组以等量蒸馏水灌胃。连续给药7 d，末次给药后1 h，经尾静脉注射50%墨汁0.1 mL/10 g，分别于注射后0.5，3.0 min 时经小鼠眼眶血管丛取血20 μL，放入2 mL 0.1% Na2CO3溶液中，摇匀，在675 nm波长处测定光密度（ OD）值。按下式计算吞噬（廓清）指数（ K）：K=（log OD1-log OD2）/（T2- T1）。处死小鼠，剖取肝、脾并称质量，按下式计算吞噬活性（校正廓清指数）α 值：α= K1/3×体质量/（肝质量+脾质量）。

2 结果

2.1 对内毒素致家兔发热模型的作用

家兔耳缘静脉注射内毒素（每1 kg 体质量1 μg）1～4 h 内，模型组家兔出现发热、发抖、蜷缩、少动、呼吸急促、耳缘静脉淤血等现象，4～6 h 状态逐渐减轻；感合剂给药组和阳性药组一般状态较模型组好。家兔发热曲线图见图1。可见，感合剂低剂量组和阿司匹林组的发热曲线与基线间的面积均小于模型组。

图1 家兔发热曲线图

表1 家兔内毒素造模后不同时间TRI 比较（ ± s，cm2，n=10）

表1 家兔内毒素造模后不同时间TRI 比较（ ± s，cm2，n=10）

注：与模型组相比，*P ＜0.05，△P ＜0.01。表2 同。

表2 家兔内毒素造模后不同时间体温升高值（ ± s，n=10）

表2 家兔内毒素造模后不同时间体温升高值（ ± s，n=10）

不同时间体温升高值（℃）组别 基础体温（℃）模型组感合剂高剂量组感images/BZ_28_214_3055_247_3084.png合剂中剂量组感images/BZ_28_214_3113_247_3142.png合剂低剂量组阿司匹林组images/BZ_28_214_3171_247_3200.png39.39 ±0.26 39.39 ±0.24 39.40 ±0.24 39.39 ±0.25 39.39 ±0.23 1 h 1.49±0.27 1.81±0.26 1.79±0.20 1.36±0.12 1.07±0.17△2 h 1.71±0.27 1.96±0.52 1.98±0.31 1.42±0.29*1.34±0.23*3 h 2.25±0.26 2.15±0.67 3.28±0.40 2.20±0.46 1.92±0.29*4 h 1.69±0.15 1.73±0.62 1.80±0.52 1.55±0.16 *1.48±0.12*5 h 0.73±0.25 0.97±0.54 0.75±0.47 0.22±0.16△0.45±0.20*6 h 0.06±0.07 0.39±0.32 0.07±0.09 0.03±0.07 0.06±0.12

2.2 对小鼠体内碳粒廓清的影响

表3 感合剂对小鼠单核细胞吞噬功能的影响（n=12）

表3 感合剂对小鼠单核细胞吞噬功能的影响（n=12）

注：与正常对照组相比，*P ＜0.05，△P ＜0.01。

2.3 体外抑菌实验

表4 感合剂与青霉素钠对各检测菌的MIC 和MBC 值

表4 感合剂与青霉素钠对各检测菌的MIC 和MBC 值

2.4 体外抗病毒实验

表5 感合剂和利巴韦林的细胞毒性测定结果

表5 感合剂和利巴韦林的细胞毒性测定结果

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表6 RSV 的TCID50 效价测定结果

表7 感合剂抗RSV 体外实验结果（%，n=3）

表7 感合剂抗RSV 体外实验结果（%，n=3）

注：ND 为未检出。

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3 讨论

中医的外感风热属现代医学中上呼吸道感染范畴。现代医学认为，受凉、淋雨、过度疲劳等因素会导致呼吸道局部甚至全身的防御功能下降，为病原微生物的迅速繁殖提供有利环境，最终导致疾病发生［7］。急性上呼吸道感染多由病毒和细菌感染引起［8］，现代医学对于细菌性上呼吸道感染的治疗多以抗生素为主，但随着致病菌耐药性的增强，临床治疗效果日渐减弱。常见的上呼吸道感染致病菌主要为革兰阳性菌，以溶血性链球菌最多见，其次为肺炎链球菌和葡萄球菌等，少见革兰阴性菌［9］。本研究中，选取4 个最常见的革兰阳性菌（甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌）及一种常见的革兰阴性菌（肺炎克雷伯菌）［10］。采用体外抑菌实验评价感合剂对常见上呼吸道感染细菌是否存在抑制生长作用。结果显示，感合剂对常见革兰阳性菌及革兰阴性菌均有抑菌作用，作用由强到弱依

次为肺炎链球菌、乙型溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、甲型溶血性链球菌、肺炎克雷伯菌。表明感合剂对常见上呼吸道感染细菌均有一定的抑制作用，且对革兰阳性菌作用强于革兰阴性菌。

上呼吸道感染常见的致病病毒主要包括流行性感冒病毒（A 型及B 型）、副流感病毒（1，2，3，4 型）、呼吸道合胞病毒等［11-12］。本研究结果显示，感合剂有微弱的抗呼吸道合胞病毒的作用。表明感合剂有一定的抗病毒作用，但其抑菌作用效果更显著。需要注意的是，上呼吸道感染大部分是由病毒感染造成的［13］，由于本研究经费所限，只对呼吸道合胞病毒进行了生长抑制实验，未进行流感病毒和副流感病毒研究，因此，在将来的研究中可重点针对其他上呼吸道感染相关病毒，继续探讨感合剂的抗病毒作用。