李婷婷，黄晓婧，王 欣，曾 桢，孔卫东，刘 莉

（四川省成都市食品药品检验研究院，四川 成都 610045）

冠心苏合丸原方出自唐开元年间《广济方》中吃力伽丸（白术丸）［1-3］，由15 味药组方，后经简化由苏合香、冰片、乳香、檀香、土木香5 味药组方，收载于2015 年版《中国药典（一部）》［4］，具有理气、宽胸、止痛功效，用于寒凝气滞、心脉不通所致胸痹、胸闷、冠心病、心绞痛等疾病的治疗。苏合香为金缕梅科植物苏合香树Liquidimibarorientalis Mill. 树干渗出的香树脂经加工精制而成的半流动性浓稠液体，味辛、性温，归心、脾经，具有开窍、辟秽、止痛的功效，为冠心苏合制剂的君药，主要成分包括萜类、黄酮类、酚酸类、苯丙素类、挥发油类等［5-9］，苏合香中苯甲酸苄酯、肉桂酸苄酯、肉桂酸肉桂酯等成分含量较高。土木香为菊科植物土木香Inulahelenium L. 的干燥根，味辛、苦，性温，归肝、脾经，具有健脾和胃、调气解郁、止痛安胎之功效［10］，主要化学成分是倍半萜内酯类，其中土木香内酯和异土木香内酯含量较高［11-13］。参考文献［14-18］，本研究中建立了同时测定冠心苏合制剂中苯甲酸苄酯、肉桂酸苄酯、肉桂酸肉桂酯、土木香内酯和异土木香内酯含量的气相色谱（GC）法，可为冠心苏合制剂的质量控制提供参考。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 7890B 型气相色谱仪，包括自动进样器、FID检测器（美国安捷伦科技有限公司）；XPE26 型电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司，精度为0.001 mg）；AE-240型电子天平（德国赛多利斯公司，精度为0.1 mg）；SK250H 型超声仪（上海科导超声仪器有限公司，功率为250 W，频率为53 kHz）；Milli-Advantage A10 型超纯水装置（美国密理博公司）。

1.2 试药

苯甲酸苄酯对照品（含量为99.9% ，批号为B000132005，北京曼哈格生物科技有限公司）；土木香内酯对照品（含量为98.4%，批号为110760-201209），异土木香内酯对照品（含量为98.4%，批号为110761-201505），均购自中国食品药品检定研究院；肉桂酸苄酯对 照 品（含 量 为 99.5% ，批 号 为 21128，德 国Dr.Ehrenstorfer GmbH 公司）；肉桂酸肉桂酯对照品（含量为100.0%，批号为LF60Q43，北京百灵威科技有限公司）；冠心苏合丸（药都制药集团股份有限公司，批号分别为160501，161101，161201，规格为每粒1.0 g；北京同仁堂科技有限公司，批号分别为17013556，17013558，17013561，规格为每粒0.85 g；长春人民药业有限公司，批号分别为20170103，20170201，规格未标注；哈药集团世一堂制药厂，批号分别为1704155，1705107，规格未标注；吉林省鑫辉药业有限公司，批号分别为20170101，20170505，规格未标注）；颈复康药业集团赤峰丹龙药业有限公司（批号分别为1702025，1704010，规格未标注）；其余试剂均为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

毛细管柱：AgilentDB1701 毛细管柱（30m×0.32mm，0.25 μm）；FID 检测器；进样口温度：220 ℃；分流比：10 ∶1；进样量：1 μL；检测器温度：250 ℃；柱温：程序升温，初始温度100 ℃，保持6 min，以每分钟10 ℃升至190 ℃，保持20 min，以每分钟15 ℃升至220 ℃，保持20 min，再以每分钟20 ℃升至260 ℃，保持10 min；载气：氮气；流速：2 mL/min。理论板数按土木香内酯峰计算不得低于20 000。色谱图见图1。

图1 气相色谱图

2.2 溶液制备

取苯甲酸苄酯、土木香内酯、异土木香内酯、肉桂酸苄酯、肉桂酸肉桂酯对照品适量，精密称定，置10 mL 容量瓶中，加水饱和乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，混合对照品贮备液。精密吸取上述对照品贮备液1 mL，置10 mL容量瓶中，加水饱和乙酸乙酯稀释至刻度，制成每1 mL含苯甲酸苄酯0.189 8 mg、土木香内酯0.074 0 mg、异土木香内酯0.047 7 mg、肉桂酸苄酯0.064 0 mg、肉桂酸肉桂酯0.093 4 mg 的混合对照品溶液。取冠心苏合丸10 丸，剪碎，混匀，取8 g（丸质量），精密称定，精密加入硅藻土8 g（硅藻土质量），研细混匀，得冠心苏分丸粉末，取3.0 g（丸实际取样量=取样量×丸质量/ （丸质量+硅藻土质量），精密称定，置锥形瓶中，精密加入水饱和乙酸乙酯25 mL，称定质量，超声处理30 min，放冷，再称定质量，用相应溶剂补足减失的质量，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得供试品溶液。按样品的配方比例和制备工艺，分别制备缺苏合香、缺土木香的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察：精密量取混合对照品贮备液0.2，0.5，1，2，3，5 mL，分别置10 mL 容量瓶中，加入水饱和乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，得系列溶液。精密量取上述系列溶液各1 μL，按拟订色谱条件进样测定，记录峰面积。以待测成分质量浓度（X，μg / mL）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，绘制标准曲线。结果见表1。

表1 各成分线性关系考察结果（ n=6）

精密度试验：精密吸取混合对照品溶液1 μL，按拟订色谱条件进样测定6 次，记录峰面积。结果苯甲酸苄酯、土木香内酯、异土木香内酯、肉桂酸苄酯和肉桂酸肉桂酯的 RSD 分别为0.25% ，0.35% ，0.18%，0.17%，0.24%，0.18%（n =6），表明仪器精密度良好。

重复性试验：取同一批（批号为161101）样品适量，精密称定，依法制备供试品溶液，共6 份，按拟订色谱条件进样测定，记录峰面积。结果苯甲酸苄酯、土木香内酯、异土木香内酯、肉桂酸苄酯和肉桂酸肉桂酯的平均含量分别为8.99，1.39，1.75，2.58，0.68 mg/g，RSD 分别为1.40%，1.63%，0.96%，1.40%，2.28%（n=6），表明方法重复性良好。

稳定性试验：取同一批样品（批号为161101）适量，精密称定，依法制备供试品溶液，分别于室温下放置0，3，6，12，18，24 h 时按拟订色谱条件进样测定，记录峰面积。结果苯甲酸苄酯、土木香内酯、异土木香内酯、肉桂酸苄酯和肉桂酸肉桂酯的 RSD 分别为1.14% ，2.31%，2.66%，1.08%，1.19% （ n=6）。表明供试品溶液在室温下放置24 h 内稳定性良好。

加样回收试验：取已知含量样品（批号为161101）适量，共9 份，分别加入低、中、高质量浓度的待测成分对照品，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定，记录峰面积并计算加样回收率。结果见表2。

2.4 样品含量测定

取冠心苏合丸14 批次，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定，记录峰面积并计算样品含量。结果见表3。

3 讨论

3.1 色谱柱选择

曾考察AgilentDB-WAX 毛细管柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm）、Agilent HP-1 毛细管柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm）、Agilent HP-5 毛细管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）、Agilent DB17 毛细管柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm）、Agilent DB1701 毛细管柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm）等为本试验色谱柱时样品的分离效果，结果表明，采用Agilent DB1701 毛细管柱分析时分离度及峰形较好，故选择上述色谱柱。

3.2 提取溶剂选择

取冠心苏合丸粉末3.0 g，精密称定，置锥形瓶中，分别精密加入无水乙醇、70%乙醇、甲醇、乙酸乙酯、水饱和乙酸乙酯、乙醇-乙酸乙酯（2 ∶1，V / V）、无水乙醇-乙酸乙酯（2 ∶1，V/ V）25 mL，称定质量，超声处理30 min，放冷，再称定质量，用相应溶剂补足减失的质量，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，依法测定，计算含量。其中，水饱和乙酸乙酯提取液中土木香内酯、异土木香内酯含量较高，甲醇提取液中苯甲酸苄酯、肉桂酸苄酯、肉桂酸肉桂酯含量较高，但与水饱和乙酸乙酯差异较小，且甲醇干扰大，基线高，故选用水饱和乙酸乙酯为提取溶剂。

3.3 提取时间选择

取冠心苏合丸粉末3.0 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入水饱和乙酸乙酯25 mL，称定质量，分别超声处理（15，30，45 min）、加热回流（15，30，45 min），放冷，再称定质量，用水饱和乙酸乙酯补足减失的质量，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，依法测定，计算含量。超声处理30 min 和45 min、回流30 min 比较，含量差异不大，但超声处理30 min 基本提取完全，故选用超声处理30 min。

表2 加样回收试验结果（n=9）

3.4 方法评价

本研究中建立的方法操作简便快速，结果准确，可用于冠心苏合丸中苯甲酸苄酯、土木香内酯、异土木香内酯、肉桂酸苄酯、肉桂酸肉桂酯的含量测定。

表3 样品含量测定结果（mg/g，n=3）