王颢霖

关键词：普鲁兰酶;克隆;毕赤酵母;诱导表达

在淀粉的加工行业中，高压酸解法作为葡萄糖生产的老工艺具有需要设备少、耗时短的优点，但其副产物较多，耗费的酸和碱的量较高，而且为了去除苦味必须采用严格控制温度、缓慢结晶的办法，需要淀粉加工工厂投入较高的人力资源和设备成本;如果运用a-淀粉酶作用于较长的淀粉分子使其断裂成小分子，使高浓度的淀粉糊在高温下糊化液化，再运用糖化型淀粉酶，就可以高效地得到目的产物。此法具有生产率高、成本低、副产物少、结晶快等优点，对于生产实践具有很大的意义。

普鲁兰酶最早是在肺炎克雷伯氏菌中被发现，并且被发现可以水解支链淀粉中的a-1，6糖苷键，不仅能够极大提高淀粉的水解效率，还能得到具有高特异性的产物，对于淀粉的糖化步骤十分重要。自然界中的天然酶一般都具有含量低、提取较难、不易制备的弊端，通常在自然界中筛选特定性质酶的效率很低。而研究酶在工程菌株中的克隆与表达，选育出更好的产酶菌株，对于获得更高酶活性，更高表达量的性能优良的酶具有非常重要的意义。

各项研究表明，普鲁兰酶可被许多菌种表达，如缓和链球菌，大肠杆菌，耐热产硫梭菌，枯草芽孢杆菌，酵母菌等等。在原核表达系统中，大肠杆菌表达系统作为研究较为深入的表达系统，在1984年最早成功异源表达了普鲁兰酶，但是其翻译后修饰的过程比较简单，表达量也很低。……