程秀莲 韩利峰 唐秀丽 赵 娜 刘宁宁

张家口市第一医院消化科 （河北 张家口，075000）

肝癌患者预后较差，5年总生存率低于15%，是全球第二大癌症死亡原因［1，2］。肝癌主要与慢性乙型肝炎病毒（HBV）和慢性丙型肝炎病毒（HCV）的感染有关［3］。其他主要危险因素包括长期接触黄曲霉毒素、慢性酒精中毒、身体肥胖、糖尿病、口服避孕药的使用和营养缺乏等［4，5］。肝癌是最难治疗的癌症之一，很多患者被诊断时已是晚期。目前经导管肝动脉化疗栓塞术（TACE）是治疗晚期肝癌患者的重要方法之一，本研究探讨TACE联合索拉菲尼对肝癌患者血清miR-21-5p、survivin蛋白、IL-21表达的影响，为临床选择治疗方案提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 研究对象 选取2014年3月至2016年4月本院收治的原发性肝癌患者124例，随机分为对照组和研究组，每组62例。纳入标准：根据病理诊断或欧洲肝病协会（EASL）制定的原发性肝细胞癌临床诊断标准，即两种影像学监测到2 cm以上的富血供病变或一种影像学显示为富血供病变且甲胎蛋白＞400 ng／m l。肝功能分级依据Child-Pugh评估。患者不能接受根治性治疗（如肝移植、肿瘤切除术或经皮射频消融术）。排除标准：不愿参与本研究或不符合诊断标准者；患有艾滋病等具有较重传染性疾病的患者；其他肿瘤转移到肝脏者；两周内使用其他药物药物者；妊娠或哺乳期妇女；合并有严重心、肾功能不全疾病的患者；对索拉非尼过敏者；患有精神类疾病不能配合研究者。

1.2 方法

1.2.1 标本收集 对照组患者给予TACE治疗，研究组患者给予TACE联合索拉菲尼治疗，索拉菲尼剂量为400 mg／次，bid。术后8周收集两组患者清晨空腹静脉血注入无抗凝剂干燥管，轻轻混匀后离心10 min，吸取上层血清于无RNA酶的EP管中，放入-80℃冰箱保存备用。收集患者清晨空腹静脉血注入促凝管，离心后取上清液，放入-20℃冰箱保存备用。

1.2.2 试剂和仪器 使用定量PCR检测miR-21-5p表达水平，实验结果采用相对定量法进行分析，计算2-ΔΔCT表示研究组相对对照组表达量的比值。RNA提取试剂盒mirvana PARIS、定量PCR检测试剂盒Tag Man MIRNA Reverse2 Transcription Kit和Taqman Real-time PCR assays购自于德国Qiagen公司。主要仪器有Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR仪、ThermoNanoDrop 2000 Lite分光光度计、旋涡震荡器、高低速离心机等。ELISA法检测survivin蛋白、IL-21水平，试剂盒由北京博奥生物有限公司提供，按试剂盒操作步骤说明进行标本检测。

1.3 统计学方法 所有数据采用SPSS 12.0统计软件进行处理，计量资料以±s表示，组间比较采用χ2或配对样本t检验；相关性分析使用Pearson相关分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者一般情况 见表1。

2.2 两组患者血清中miR-21-5p、survivin蛋白、IL-21检测结果 见表2。

2.3 miR-21-5p、survivin蛋白、IL-21判断原发性晚期肝癌患者术后病情控制效果的临床意义 将124例患者重新分为术后疾病控制组和疾病进展组。采用RECIST标准评估治疗效果，分为完全缓解（CR）、部分缓解（PR）、稳定（SD）和疾病进展（PD）4个等级。疾病控制组为CR、PR、SD的总例数，共82例；疾病进展组为PD的例数，42例。疾病进展代表术后病情在8周后未得到控制。本研究应用受试者操作特性曲线（ROC）分析患者血清中miR-21-5p、survivin蛋白、IL-21水平判断晚期肝癌患者术后病情控制效果的ROC曲线下面积（AUC）分别为0.879、0.924、0.845，见图1。说明使用此3项指标判断晚期肝癌患者术后病情是否得到控制准确性较高。

表1 一般临床资料在两组患者间比较

表2 两组患者miR-21-5p、survivin蛋白、IL-21的结果比较（±s）

表2 两组患者miR-21-5p、survivin蛋白、IL-21的结果比较（±s）

与对照组比较，*P＜0.05

组别 例数 miR-21-5p survivin蛋白（ng／L） IL-21（ng／L）62 78.69±5.32 1034.69±627.81研究组 62 0.56±0.05* 52.85±4.25* 2154.23±504.95对照组*

图1 miR-21-5p、survivin蛋白、IL-21判断晚期肝癌患者术后病情控制效果ROC曲线图

2.4 两组患者1和3年存活率 电话随访两组患者，研究组患者1、3年存活分别为53例（85.4%）和18例（48.4%），对照组分别为45例（72.6%）和18例（29.0%），差异均有统计学意义（均P＜0.05）。

3 讨论

自20世纪80年代的分子革命以来，对癌症病因的认识更加深入，从而发现和发展了针对性的治疗方法，以抑制癌症特异性途径。由于索拉非尼对肾细胞癌和肝细胞癌的作用，已被临床批准用于治疗晚期肾细胞癌和肝细胞癌［6］。索拉非尼与传统疗法相结合也具有潜在的临床应用价值。一项临床试验表明，索拉非尼联合TACE治疗不能切除的肝癌，疾病控制率高达91.2%，联合治疗大大延长了中晚期肝癌患者的生存时间［7］。在本研究中，索拉非尼联合TACE组患者的治疗有效率和疾病控制率相对于单纯TACE治疗组患者均显著提高。

许多研究表明，小RNA调控许多细胞过程，包括分化、增殖、迁移和凋亡［8］。小RNA miR-21-5p在多种癌症中高度表达，如喉癌、胃癌、结直肠癌、乳腺癌和非小细胞肺癌等，可以促进癌细胞增殖［9-13］。本研究发现索拉非尼和TACE联合应用能明显降低患者血清中的miR-21-5p含量，有助于改善患者预后。survivin蛋白在大多数人类癌症中呈高度表达，通过抑制凋亡等多种途径促进肿瘤的发展［14］。survivin蛋白的过度表达与肿瘤恶性、化疗抵抗和局部肿瘤复发相关，使其成为人类癌症治疗的一个有吸引力的靶点。本研究发现索拉非尼和TACE联合应用能明显降低患者血清中的survivin蛋白含量。IL-21是T细胞的生长因子，在T细胞的活化和增殖中起重要作用，激活B细胞和巨噬细胞，激活T细胞分泌IL-2［15］。IL-21可以激活免疫系统，显著抑制肝癌细胞的生长［16］。本研究发现索拉非尼联合TACE能明显升高患者血清中的IL-21含量，这有助于帮助患者抵抗癌症，改善预后。本研究应用受试者操作特性曲线（ROC）发现miR-21-5p、survivin蛋白、IL-21在判断晚期肝癌患者术后病情控制效果方面的价值。本研究通过对患者电话随访发现索拉非尼联合TACE治疗可显著增加肝癌患者的3年生存率，降低复发率。因此，联合索拉非尼和TACE治疗可能通过调节肝癌患者体内miR-21-5p、survivin蛋白、IL-21表达水平，影响治疗效果。三者可能是晚期肝癌患者术后病情控制效果的诊断标志物，对患者术后病情评估具有重要临床意义，但具体机制有待于进一步探讨。