魏然 柯吴坚 陈文韬 谭玲俏 刘雅慧 吕萍 黄涛张君 张晓辉 王柳苑 车雅敏

1天津医科大学总医院皮肤性病科300052；2南方医科大学皮肤病医院皮肤二科，广州510091；3阳江市公共卫生医院皮肤性病科，广东529500；4清远市慢性病防治医院皮肤性病科，广东511500

密螺旋体属（Treponema pallidum，TP）包括雅司苍白密螺旋体（Treponema pallidum ssp.Pertenue，TPE）、未分类的类人猿密螺旋体（Fribourg-Blanc，FB）、地 方 密 螺 旋 体（Treponema pallidum ssp.endemicum，TEN）、梅毒苍白密螺旋体（Treponema pallidum ssp. Pallidum，TPA）等。雅司病的病原体TPE、地方性梅毒的病原体TEN 与FB 的基因组具有高度亲缘性，且雅司病的临床症状与血清学检测特征难以和梅毒区分［1-2］。因此寻找一种合适的TP分型方法，对TP 的分子流行病学研究和临床防治十分关键。

既往研究显示，TPA基因亚型与毒力、耐药性、病期的发展转归等具有密切关系［3］。现有的TPA酸性重复蛋白（acidic repeat protein，Arp）/重复基因（T.pallidum repeat gene，Tpr）双基因分型方法［4］和Arp/Tpr/TP0548 三基因联合分型法［3］具有结果稳定、重复性好的特点，适用于多种来源的临床样本，目前被普遍采用。然而，我国高达88%的TPA株为14D/f 亚型，无法得到进一步区分，因此现有的双/三基因分型方法均不适用于我国梅毒流行株的研究［1，3，5］。近年来研究者对多个可变位点进行分析，试图选取TP0279、TP0558 、TP0326 等新的基因位点用于临床鉴别，但分型效率均不理想［5-6］。我们前期研究发现，在TP 不同菌种和TPA 不同菌株中TP0136存在基因异质性［7］。利用这一特点，我们通过研究TP0136蛋白在TPA、TPE、FB和TEN 各种之间的异质性，建立一种新的TP分子分型方法。

材料与方法

1.主要试剂与仪器：梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）试剂盒（日本富士瑞必欧株式会社），甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）试剂盒（上海荣盛生物技术有限公司），QIAamp DNA Mini 试剂盒（德国Qiagen公司），T100PCR仪（美国Bio-Rad公司）。……