桔贝合剂的薄层色谱鉴别方法研究

2020-08-13沈立茹李瑞宏李敏

世界最新医学信息文摘 2020年61期

沈立茹，李瑞宏，李敏

（1.唐山市食品药品综合检验检测中心，河北唐山 063020；2.河北省儿童医院药剂科，河北石家庄 050031；3.华北理工大学附属医院，河北唐山 063000）

0 引言

桔贝合剂是儿科临床常用的中成药复方制剂，含有中药材桔梗、黄芩、甘草等，主要功效为润肺止咳。现行标准[1]中对桔贝合剂的质量控制仅有性状及检查，过于简单，关于有关组分的定性鉴别和含量测定均未涉及。有文献[2]报道了方中浙贝母和枇杷叶的TLC鉴别，本作者也对方中的7个主要成分进行了研究[3-4]，为进一步提高桔贝合剂的质量标准，保证其质量稳定性及安全有效性，现增加桔梗、黄芩、甘草3味药材的薄层色谱鉴别项。

1 仪器与试药

黄芩苷、甘草苷对照品及桔梗对照药材（批号分别为：110715-201117、111610-201106、121028-201612，中国食品药品检定研究院）；桔贝合剂（批号：18070001）市场采购自太极集团重庆桐君阁药厂有限公司；超声波清洗仪（宁波新芝生物科技股份有限公司），硅胶G薄层板（青岛海洋化工有限公司）；所用试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 桔梗的TLC法鉴别

2.1.1 溶液的制备：

（1）对照药材：取桔梗对照药材粉末2.0 g，加水30 mL与7%硫酸乙醇10 mL的混合液20 mL，回流提取2h，放冷后，过滤，滤液用乙酸乙酯振摇提取，每次20 mL，共2次，合并提取液并蒸干，取残渣，用甲醇溶解并定容至2.0 mL，即得。

（2）供试品溶液：取桔贝合剂10 mL，加7%硫酸乙醇10 mL，混匀，用乙酸乙酯做提取液，振摇提取2次，每次10 mL，将提取液合并，置水浴上蒸干，残渣用1.0 mL的甲醇溶解，即得。

（3）阴性对照溶液：同法取缺桔梗阴性样品（自制），制成阴性对照溶液。

2.1.2 鉴别：照薄层色谱法[5]试验，吸取上述3种溶液各5μL，在同一硅胶G薄层板上点样，以三氯甲烷-甲醇（20:1）为展开剂，展开，取出，室温晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热约5分钟。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色的紫色斑点，Rf值为0.22，阴性无干扰，见图1。

2.2 黄芩的TLC法鉴别

2.2.1 溶液的制备：

（1）对照品溶液：取黄芩苷对照品10 mg，加甲醇溶解并稀释至10 mL，即得。

（2）供试品溶液：取桔贝合剂2 mL，加甲醇10 mL，超声提取30 min，过滤，取滤液蒸干，残渣用甲醇溶解并定容至2.0 mL，即得。

（3）阴性对照溶液：同法取无黄芩的阴性样品（自制），制成阴性对照溶液。

2.2.2 鉴别：照TLC法试验，分别吸取上述3种溶液各5μL，点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸（5:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液，置日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，分别显相同颜色的墨绿色斑点，Rf值为0.30，阴性无干扰。结果见图2。

2.3 甘草的TLC法鉴别

2.3.1 溶液的制备：

（1）对照品溶液：取甘草苷对照品10 mg，加甲醇溶解并稀释至10 mL，即得。

（2）供试品溶液：取本品10 mL，正丁醇为提取液，振摇提取2次，每次10 mL，合并提取液，水浴蒸干，残渣加甲醇1.0 mL溶解，即得供试品溶液；

（3）阴性对照溶液：取自制的无甘草的阴性样品，照上述方法制成阴性对照溶液。

2.3.2 鉴别：照TLC法试验，吸取对照溶液5μL，供试品和阴性对照溶液10μL，在同一硅胶G薄层板上点样，以三氯甲烷-甲醇-水（20:5:0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，以5%香草醛硫酸溶液为显色剂，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的黄色斑点，Rf值为0.41，阴性无干扰。结果见图3。

图1 桔梗的薄层色谱 1.桔梗对照药材 2.样品 3.缺桔梗阴性对照；图2 黄芩苷的薄层色谱 1.黄芩苷对照品 2.样品 3.缺黄芩阴性对照；图3 甘草苷的薄层色谱 1.甘草苷对照品 2.样品 3.缺甘草阴性对照

3 讨论

经过查阅文献资料[6-9]，本研究分别对桔贝合剂中的桔梗、黄芩、甘草3味药材进行了TLC鉴别研究。在桔梗的薄层色谱鉴别中，比较了三氯甲烷、甲醇、乙酸乙酯的提取效果，结果乙酸乙酯提取杂质少，斑点清晰；并比较了三氯甲烷-甲醇、三氯甲烷-乙醚、石油醚-乙酸乙酯等不同展开系统的展开效果，结果三氯甲烷-甲醇展开效果好，分离度好，阴性无干扰，因此可作为桔贝合剂中桔梗的鉴别方法。

在黄芩的薄层色谱鉴别中，参照文献中含量测定的研究，选择主成分黄芩苷作为对照品，甲醇超声提取30分钟，并参照药典标准，选择乙酸乙酯-甲酸为展开剂，考察了不同比例的展开效果，结果以比例为5:1最佳，喷以1%三氯化铁乙醇溶液显色后，主斑点位置上显墨绿色斑点，分离效果好。

在甘草的薄层色谱鉴别中，选取甘草中的主成分甘草苷作为对照品，比较甲醇、正丁醇、乙酸乙酯的提取效果，结果以正丁醇提取效果比较明显；考察了正己烷-乙酸乙酯-丙酮-甲酸及三氯甲烷-甲醇-水两个展开系统不同组分比例的展开影响，结果以三氯甲烷-甲醇-水（40:10:1）最优。试验中点样量均按一定梯度点样，选择合适的点样量。