薛瑞婷，李 栋

（吕梁学院，山西吕梁 033000）

在畜牧业生产中，抗生素被长期添加到饲料中以维持动物健康、促进动物生长。但抗生素的不当使用会导致严重的细菌耐药性，受损人类健康，对环境也有严重影响（刘正文，2019）；因此，对抗生素替代产品的研究迫在眉睫。银耳多糖（Tremella Polysaccharide，TP）作为一种酸性杂多糖是银耳的主要活性成分，能调节动物免疫、糖脂代谢，保护肠道健康，促进动物生长（杨永生等，2011）。研究发现，日粮添加不同剂量的TP均能显著提高仔猪生长性能，而以0.4%的添加量效果最佳（邹健，2006）。断奶仔猪由于受到饲料变化、应激及环境变化的影响会造成肠道形态与功能受损，腹泻率提高，生长性能遭到抑制（房祥军，2006）。因此，本试验旨在研究TP对断奶仔猪肠道健康的影响。

1 材料与方法

1.1 试验动物与试验设计本试验选取20头遗传背景一致、健康状况良好、胎次和体重接近的21日龄断奶仔猪，随机分为对照组（饲喂基础饲粮）和TP组（基础饲粮中添加0.4% TP），每个处理10个重复，每个重复1头猪。预饲期3 d，试验期为21 d。

1.2 试验材料TP是采用银耳孢子深层液体发酵，干燥，每克粉末由5 mL发酵液载体干燥而成，TP含量为56.7%。

1.3 试验饲粮所有试验猪均饲喂玉米-豆粕型饲粮，基础饲粮组成及营养水平见表1。TP组在对照组基础上添加0.4% 银耳多糖。

1.4 饲养管理试验在四川省某规模化养殖场进行，所有仔猪单笼饲养于仔猪代谢笼中。所有试验猪按常规管理方式进行饲养管理。正式试验期间仔猪自由采食与饮水，每日饲喂4次（08∶ 00，12∶ 00，16∶ 00，20∶ 00），并记录试验猪腹泻情况。

1.5 样品采集与处理在试验第22天屠宰所有试验猪，迅速分离肠段。在空肠固定部位取样品，用4%多聚甲醛溶液固定。另外，取空肠相同部位样品用载玻片将空肠黏膜轻轻刮下来，置于灭菌EP试管分装，-80℃保存待测；取盲肠和结肠食糜于灭菌EP管中，液氮速冻，-80℃保存待用。

1.6 测定指标与方法

1.6.1 空肠形态结构学 空肠中段取样后立即于4%多聚甲醛溶液中固定，经过处理后，每个组织样品选取10个无损的视野单元，在光学显微镜下观察并拍照，用目镜测微镜测定绒毛高度和隐窝深度，并进行计算。

表1 基础饲粮组成及营养水平（风干基础，%）

1.6.2 空肠黏膜消化酶活性 采用南京建成生物工程研究所相应的试剂盒测定胰蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、蔗糖酶、乳糖酶和麦芽糖酶活性。

1.6.3 盲肠食糜微生物菌群数量测定 盲肠食糜微生物菌群数量测定具体操作步骤如下：

（1）食糜总RNA的提取：称取0.2 g盲肠和结肠食糜样品后，DNA的提取采用D4015-01 E.Z.N.A.TM Stool DNA isolation（Omega，美 国）试剂盒进行。

（2）引物和探针设计：参考Qi（2013）等。

（3）实时荧光定量PCR：按照FP-203 Real Master Mix（天根公司，中国）试剂盒说明操作方法检测乳酸杆菌、大肠杆菌、芽孢杆菌和双歧杆菌。按照RR820A（TaKaRa，日本）试剂盒说明操作方法检测总菌。

1.7 数据统计分析试验数据采用独立样本t检验对试验数据进行分析，P＜0.05表示差异显著；结果以“平均值±SEM”表示。

2 结果

2.1 日粮添加TP对仔猪空肠形态结构的影响由表2可知，与对照组相比，TP组仔猪肠绒毛高度和绒毛高度与隐窝深度的比值显著提高（P＜0.05）；仔猪空肠隐窝深度有降低趋势（P=0.083）。

表2 日粮添加TP对仔猪空肠形态结构的影响

2.2 日粮添加TP对仔猪空肠黏膜消化酶活性的影响由表3可知，与对照组相比，日粮添加TP可显著提高仔猪空肠淀粉酶、脂肪酶和乳糖酶活性（P ＜ 0.05）。

表3 日粮添加TP对仔猪空肠黏膜消化酶活性的影响

2.3 日粮添加TP对仔猪盲肠食糜微生物菌群数量的影响由表4可知，与对照组相比，TP组仔猪盲肠食糜总菌和大肠杆菌数量显著降低（P＜ 0.05）。

表4 日粮添加TP对仔猪盲肠食糜微生物菌群数量的影响 lg cfu/g

3 讨论

前人研究证明，银耳多糖是银耳的主要活性成分，可分为酸性杂多糖、中性杂多糖、酸性杂多糖、胞壁多糖和胞外多糖5大类。近年来发现，银耳多糖具有广泛的药理作用，能促进动物肠道健康发育。

3.1 日粮添加TP对仔猪空肠形态结构的影响小肠上皮的健康状况保证了其正常的生理功能（Liu等，2009）。黏膜上皮形态的损伤会直接影响肠屏障功能，损害营养物质的吸收。肠道黏膜绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度（V/C）对仔猪消化吸收功能有显著影响。V/C值越大，肠黏膜面积越大，消化吸收能力更强；V/C值越小，消化吸收能力更差。研究表明，断奶应激导致仔猪肠道黏膜绒毛萎缩、高度下降、隐窝深度加深（顾宪红等，20001）。邹健等（2006）研究发现，日粮添加TP能显著增加绒毛高度、降低隐窝深度，改善肠道形态，这与本研究结果基本一致。本研究发现，与对照组相比，日粮添加0.4% TP可显著提高仔猪肠绒毛高度和绒毛高度与隐窝深度的比值，并有降低仔猪空肠隐窝深度的趋势。这表明日粮添加0.4%银耳多糖能显著促进断奶仔猪空肠形态结构健康发育。

3.2 日粮添加TP对仔猪空肠粘膜消化酶活性的影响消化酶是将食糜分解成动物可吸收的小分子物质，促进食物中的糖类、脂肪、蛋白质的分解，可将其转变成小分子物质，促进动物的消化吸收（高顺宾和吴天星，2003）。本研究发现，与对照组相比，日粮添加TP可显著提高仔猪空肠淀粉酶、脂肪酶和乳糖酶活性。杜恒裔等（2019）研究发现，饲粮添加浒苔多糖可提高肉鸡肠道内容物消化酶活性，有利于对养分的消化吸收。本研究结果表明，日粮添加0.4%银耳多糖能显著提高仔猪空肠消化酶活性，促进肠道消化吸收。

3.3 日粮添加TP对仔猪盲肠食糜微生物菌群数量的影响已有研究表明，肠道微生物区系可以被认为是胃肠道健康的重要决定因素（Sohail等，2012）。在应激条件下，肠道微生物生态的稳定受到干扰，导致生物失调（Sohail等，2012）。银耳多糖的作用机制包括3方面：（1）细菌的相互抑制；（2）组织外源性病原菌在肠道内的定植；（3）竞争性排泄（邹健，2006）。本研究发现，与对照组相比，日粮添加TP可显著降低仔猪盲肠食糜总菌和大肠杆菌数量。大肠杆菌是一种条件致病菌，在一些条件下可能造成动物发生胃肠道感染等，导致动物腹泻加剧（宋丙奎等，2009）。邹健等（2006）研究发现，日粮添加TP能显著增加双歧杆菌和乳酸杆菌数量，降低大肠杆菌数量。这表明日粮添加0.4%银耳多糖可调节肠道菌群结构，促进肠道健康。

4 结论

以上研究表明，日粮补充0.4%银耳多糖可显著改善断奶仔猪空肠形态、提高空肠黏膜消化酶活性，调节仔猪盲肠菌群结构，促进肠道健康发育。