杜钰莹，王 悦，赖治臻，田志新*，李智立*

(1.中国医学科学院基础医学研究所 北京协和医学院基础学院 生物物理及结构生物学系， 北京 100005;2.同济大学 化学科学与工程学院 上海市化学品分析风险评估与控制重点实验室， 上海 200092)

肺癌(lung cancer)是全球高发的恶性肿瘤之一[1]。慢性肺炎的症状与早期肺癌相似[2]。肺部疾病与多种蛋白质的结构改变相关[3-4]，N-糖基化修饰是蛋白质结构变化的常见形式之一，它对蛋白质结构和功能发挥着重要的调控作用[5]，在不同的病生理状态下蛋白质N-糖基化修饰存在显著差异[6-7]。目前大部分研究主要关注总蛋白质的N-糖基化修饰[7]，对疾病特异蛋白质N-糖基化修饰报道的较少[8-10]。

大量临床样本的研究证实，血液中免疫炎性相关蛋白复合物(immunoinflammation-related protein complexes, IIRPCs)与慢性疾病发生、发展密切相关[11]，且其中的免疫球蛋白G(IgG)保守区(Fc)N-糖基化修饰可个体化区分良性疾病和癌[8,10]。本研究采用高效液相色谱-串联质谱(high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry，HPLC-MS/MS)技术，鉴定了肺癌和慢性肺炎患者血清中IIRPCs的蛋白质N-聚糖和连接位点。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 研究对象：肺腺癌患者和慢性肺炎患者血清样本各1份。样本收集严格遵循人体医学研究伦理要求，并经中国医学科学院基础医学研究所伦理审查委员会批准(伦理审批编号：020-2014)。

1.1.2 主要试剂：甘氨酸、甲叉双丙烯酰胺、丙烯酰胺、三羟基甲基氨基甲烷、考马斯亮蓝G250、过硫酸铵、硼酸和四甲基乙二胺(Amresco公司)；碳酸氢铵(Sigma-Fluka公司)；色谱级乙腈和色谱级三氟乙酸(Thermo Fisher Scientific公司)；测序级改良胰蛋白酶(Roche 公司)。……