周丽萍，毛晓春，李 琴

(襄阳市中心医院 眼科， 湖北 襄阳 441000)

糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy，DR)是糖尿病的主要并发症之一，严重时可导致失明，极大地影响患者身心健康[1]。目前，DR的发病机制尚不十分清楚，并且无确切有效的治疗方法，探讨DR的发病机制并寻找安全有效的治疗方法具有重要意义。高血糖能够加速细胞凋亡引起视网膜缺血、坏死，新生血管释放产生新生血管[2]。DR与高血糖引起的生理、生化改变造成的毛细血管损伤有关[3]。微小RNA(microRNA，miRNA)是一类长度约为22～25个核苷酸的小分子单链RNA，其与血管性疾病、新生血管的形成等关系密切[4-6]。微小RNA芯片检测发现高糖环境下人视网膜血管内皮细胞(human retinalendothelial cells，HRECs)中miR-1908表达下调[7]，但miR-1908对高糖诱导的HRECs细胞凋亡的影响及其机制还不清楚。本研究主要探讨了miR-1908对高糖诱导的HRECs细胞凋亡的影响及作用机制，以期为阐明DR发病机制及分子治疗靶点的选择提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 细胞和实验试剂

人视网膜血管内皮细胞系(human retinalendothelial cells，HRECs)(ATCC细胞库)；胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)和DMEM培养基( Gibco公司)；胰蛋白酶(Sigma公司)；LipofectamineTM2000试剂盒(Invitrogen公司)；miR-1908模拟物(mimics)及模拟阴性对照物、整合素连接激酶(integrin-linked kinase，ILK)的小干扰RNA(基尔顿生物科技上海有限公司)；Trizol试剂(Tiangen公司)；反转录试剂盒和PCR试剂盒(大连宝生物工程有限公司)；Annexin V-FITC/PI凋亡试剂盒(北京宝赛生物技术有限公司)；RIPA裂解液和BCA蛋白测定试剂盒(上海碧云天生物技术研究所)；PAGE膜(Bio-RAD公司)；ILK抗体(Santa Cruz公司)；B淋巴细胞瘤-2 (B-cell lymphoma-2，Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bcl-2-associated X protein，Bax)和磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde phosphate dehydro-genase，GAPDH)抗体(CST公司)；辣根过氧化酶标记的IgG(北京中山生物技术有限公司)；……