宋志明，余舒杰，焦 洁，李平平，李红梅，钱孝贤*

(1.河南大学第一附属医院 心内科， 河南 开封 475001； 2.中山大学附属第三医院 心内科，广东 广州 510630)

动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)是心血管疾病发生和发展的病理基础。血管内皮细胞功能损伤是AS形成的重要机制之一，早于动脉粥样硬化形态学改变，在心血管病的预测和防治方面具有极其重要

的意义[1-2]。氧化应激会导致血管内皮细胞的功能紊乱，从而导致心血管疾病的发生[3]。细胞间黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1, ICAM-1)和血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion mole-cule-1, VCAM-1)参与AS的形成[4]，但其作用机制尚不清楚。人参皂苷Rb1(ginsenoside Rb1，gRb1)已经被证实具有内皮细胞功能保护作用[5-6]。

本研究拟建立人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells ,HUVECs)氧化损伤模型，探讨gRb1的药理效果，为其进一步的临床应用提供研究基础。

1 材料与方法

1.1 材料和主要试剂

gRb1(HPLC 98.1%，成都普菲德生物技术有限公司)；H2O2、MTT、DMSO(Sigma-Aldrich公司)；异丙醇、无水乙醇(广州化学试剂厂)；Ⅰ型胶原酶、无血清培养基、M199培养基和胎牛血清(Gibco公司)；内皮细胞生长因子(BD公司)；细胞裂解液、蛋白定量试剂盒和凋亡试剂盒(南京凯基生物科技发展有限公司)；抗ICAM-1抗体(Cell Signaling Technology 公司)；抗VCAM-1抗体(Santa Cruz 公司)；抗GAPDH内参抗体(Proteintech Group公司)；小鼠及兔Ⅱ抗(武汉博士德生物工程有限公司)；分型SOD活性及MDA检测试剂盒(南京建成生物公司)。

1.2 方法

1.2.1 细胞的分离培养:原代HUVECs分离培养见既往报道[7]。若无特殊交代，研究所用细胞均为1～3代。本研究经河南大学第一附属医院伦理委员会批准，符合Helsinki原则。

1.2.2 细胞的分组与处理:H2O2氧化损伤诱导实验：细胞分为对照组和不同浓度的H2O2(20、40、80和160 μmol/L)组。……