饶金鹏，邱 枫，蔡益婷，魏 凯，金 敏，金 帆

(浙江大学医学院 1.附属第二医院 生殖医学中心； 2.附属妇产科医院 生殖遗传教育部重点实验室， 浙江 杭州 310000)

筛选获得高质量精子是辅助生殖(assist reproductive technology, ART)体外受精成功的关键之一，密度梯度离心(density gradient centrifugation, DGC)或上游(swim-up, SU)因操作简单，并能在较短时间内将活力较好的精子从精浆、死精、白细胞、病原微生物等有害物质中分离出来，而成为广大生殖医学中心采用的主流方法。已有研究显示DGC及SU处理后的运动精子在DNA完整性、细胞膜成熟度或细胞超微结构上存在一定比例的缺陷[1]，这可能影响ART的受精率，增加缺陷精子与卵子结合的风险。

人体内受精是一个自然选择的过程。精子需从阴道开始，经过长距离的游动，先后经过宫颈、子宫和输卵管，而当精子游至输卵管时，由于管腔内温度梯度的存在，使得具有热趋向性的获能精子定向游到壶腹部与卵子结合[2-3]。但目前绝大多数生殖医学中心在使用DGC或SU处理完精液后，未对精子进行进一步的长距离筛选，而将温度趋向性机制引入ART的报道也仅见于哺乳动物[4-5]。本研究通过增加获能精子的水平游动距离，并设置温度梯度，分析不同距离、温度条件下精子活力、浓度、正常形态率及DNA碎片率等指标的变化，探讨适宜的距离-温度条件组合(distance-temperature-combined selection conditions)，为进一步改善ART中优质授精精子的制备提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

试剂：40%和80%梯度离心培养液(SAGE公司)；精子洗涤液Sperm Rinse、配子处理液G-GAMETE、石蜡培养油(Vitrolife公司)；人血清白蛋白(Irvine公司)；……