裴宇盛，蔡 彤，陈 晨，高 华

(中国食品药品检定研究院化学药品检定所药理室，北京 102629)

细菌内毒素检查法和热原检查法是《中国药典》(2015版)[3]中收载的用于检测注射剂热原污染的方法，一般品种热原控制首选细菌内毒素检测。家兔热原检查法由于使用实验动物，并且只能定性检测无法定量给出具体数值，可作为终产品放行方法，但对生产过程中质量控制意义较小。新的体外热原检测方法[4-5](单核细胞活化实验)是根据人的发热机理而设计的一类检测方法，报告基因法本质是对单核细胞活化实验的改良。通过引入报告基因而简化实验流程。

本研究选择了人源高表达TLR2受体的HEK细胞系和人源高表达TLR4受体的HEK细胞系进行检测，并选择了细菌内毒素检查法作对照研究。参照药典要求[6]3种方法分别进行线性与范围、专属性、检测限、耐用度、回收率等方法学研究，其中以专属性为研究重点。以期为MPLA佐剂建立适宜的热原质量控制方法。

1 材料与方法

1.1 主要试剂细菌内毒素国家标准品(批号：150800-201601)中国食品药品检定研究院提供；动态显色法试剂盒(货号：KC-125，批号：1611182)购自湛江安度斯生物有限公司；人源高表达TLR2受体的HEK细胞系(货号：hkb-htlr2)购自美国InvivoGen公司；人源高表达TLR4受体的HEK细胞系(货号：hkb-htlr4)购自美国InvivoGen公司；合成MPLA分别购买自sigma(货号：5086PHB029，批号：69800P-5mg-B-029)和InvivoGen公司(货号：tlrl-mpls，批号：MPS-40-02)。

1.2 线性和范围

1.2.1细菌内毒素检查法 标准曲线制备：用1 mL细菌内毒素检查用水(BET水)溶解细菌内毒素标准品，混匀15 min后，稀释制备标准内毒素溶液，每步稀释混匀不少于30 s；……