丁季飞，陶 辉，石开虎，徐盛松

(安徽医科大学 第二附属医院心胸外科、心血管病研究中心，安徽 合肥 230601)

心肌纤维化是各种心血管疾病不可改变的病理变化过程，有助于心肌重塑[1-2]。研究表明心肌纤维化与心房颤动的发生、发展密不可分，是心房颤动发生结构重构的重要病理基础[3]。心肌纤维化主要表现为胶原沉积和心脏成纤维细胞(CFs)的积累，是心室重塑的病理学标志[4]。目前，心肌纤维化形成的具体机制尚不明确，但已发现心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts，CFs)的增殖是心肌纤维化形成的关键因素[5-6]。文献报道DNA甲基化参与心肌成纤维细胞的增殖。DNA甲基化由一组保守的酶催化，称为DNMT[7]。DNA甲基化转移酶目前已知有3种，包括DNMT1，DNMT3a和DNMT3b[8]。DNMT1在肝纤维化中已报道较多，但在心肌纤维化中报道甚少[9]。本研究以DNMT1为突破点，通过观察DNMT1对CFs增殖的影响，探讨其与心肌纤维化的关系及可能作用机制，为预防及治疗心肌纤维化提供新的思路。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1实验动物 40只清洁级Sprague-Dawley(SD)乳鼠，体质量(10±2)g，鼠龄1～3 d左右。所有乳鼠均购于安徽医科大学动物实验中心，动物许可证号：scxk (皖) 2017-001。

1.1.2试剂 DMEM培养基(美国HyClone公司，AE29005267)；DMSO、CCK-8相关试剂(美国Sigma公司,5439001000；68121000)；胎牛血清(Gibco公司,1581729)；小干扰DNMT1(siDNMT1)转染试剂盒(上海吉玛基因公司,96486)；细胞周期试剂盒(美国BD公司,9183478)；Ez Omics One-Step qPCR试剂盒；SYBR PremixExTaqⅡ(2×) (TaKaRa公司，RR820A)；TRIzol试剂(美国Life Technology公司,190906)、LipofectamineTM2000(美国Invitrogen公司,1718554)；DNMT1和I型胶原前胶原A1(Col1A1)的一抗(Proteintech Group,Inc.中国武汉公司,00053896;00066288)；α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA) (武汉博士德生物工程有限公司,1A4)、β-actin的一抗(北京中杉金桥生物技术有限公司，19AW0401)。

1.1.3仪器 1300 SERIES A2型生物安全柜(美国Thermo Fisher Scientific公司)；二氧化碳培养箱(美国Thermo Fisher Scientific公司)；……