纪世彬

作者单位：上海市青浦食品药品检验所检验室，上海201799

药物的溶出度检查是对工艺水平和制剂品质的一种有效的评价手段，可以反映药物的生产工艺、处方组成、晶型、粒度和辅料品种等的差异，也是有效评价制剂均匀度、活性成分和生物利用度的标准。溶出度作为体外实验相较生物利用度而言简单易行，作为质量控制的指标，不失为一个经济有效的手段［1］。复合维生素B片由泛酸钙、维生素B1、烟酰胺、维生素B2、维生素B6五种有效成分加工而成，临床用于治疗和预防由B族维生素缺乏所导致的各种疾病，现行的质量标准《卫生部颁药品标准》化学药品及制剂第一册WS1-73（B）-89中仅规定了崩解时限检查项［2］，但崩解时限检查不能全面反映药物在体内的溶出情况，本研究自2018年7月至2019年1月建立的方法为考察复合维生素B片中5种维生素的体内溶出情况提供了一种客观的标准［3-5］。

1 仪器与试药

1.1仪器Waters 2695高效液相色谱仪（配2996型二极管阵列检测器）、BP211D电子天平（德国赛多利斯公司）、ZRS-8G智能溶出试验仪（天津天大天发科技有限公司）。

1.2试剂和药品烟酰胺（批号：100115-200703，含量：99.9%，100毫克∕支）、维生素B1（批号：100390-201304，含量：97.0%，100毫克∕支）、维生素B2（批号：100369-201504，含量：98.2%，100毫克∕支）、泛酸钙（批号：100370-200301，含量：100%，100毫克∕支）、维生素B6（批号：100116-201103，含量：100%，100毫克∕支）均购自中国食品药品检定研究院。复合维生素B片①（南京白敬宇制药有限责任公司，生产批号180102）；复合维生素B片②（上海新黄河制药有限公司，生产批号02418002）；乙腈、庚烷磺酸钠（色谱纯），冰乙酸、三乙胺（分析纯），盐酸（优级纯），水（超纯水）。

2 方法与结果

2.1色谱条件色谱柱：Waters XBridge C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；以5 mmol∕L庚烷磺酸钠水溶液（含0.15%三乙胺，用冰醋酸调节pH值至5.0）为流动相A，以乙腈为流动相B；梯度洗脱：0～4 min，95%A；4～15 min，95%～80%A；15～20 min，80%～95%A；20～25 min，95%A；流速：1.0 mL∕min；进样量：50μL；柱温：3 5℃；检测波长：280 nm（烟酰胺、维生素B2、维生素B6和维生素B1），210 nm（泛酸钙）。

2.2溶液的配置

2.2.1 对照品溶液 精密称取维生素B1对照品、维生素B2对照品、维生素B6对照品、及泛酸钙对照品各10 mg，分别置于20、100、100、100 mL容量瓶，加0.005 mol∕L盐酸溶解并稀释至刻度。摇匀，作为对照品贮备液（1）、（2）、（3）、（4）。精密取烟酰胺对照品10 mg，置50 mL容量瓶中，精密加入对照品贮备液（1）5 mL、（2）20 mL、（3）3 mL、（4）10 mL，加0.005 mol∕L盐酸溶解并稀释至刻度。

2.2.2 供试品溶液 按《中华人民共和国药典》2015年版四部通则0931第三法操作，以0.005 mol∕L盐酸100 mL为溶出介质，于（37±0.5）℃条件下，转速为100 r∕min，于20 min取样1 mL，立即经0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液，依法测定，计算累计溶出百分率。

2.3检出限试验及线性关系分别精密吸取“2.2.1”项下对照品溶液2、4、6、8及10 mL分别置10 mL量瓶中，加0.005 mol∕L盐酸稀释至刻度，摇匀。取50μL注入液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件进样分析，测定峰面积。结果以峰面积y为纵坐标，以各组分的浓度x为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程。同时分别以信噪比约为10∶1和3∶1时的浓度作为定量限和检测限。结果见表1。

2.4精密度试验精密吸取标准曲线三号浓度梯度标准溶液50μL，注入液相色谱仪，连续6次进样测定峰面积，分别计算RSD。结果维生素B1、维生素B2、烟酰胺、维生素B6、泛酸钙的RSD分别为0.18%、0.10%、0.51%、0.65%、0.66%。

2.5稳定性试验取复合维生素B片②20 min时的供试品溶液①，分别于室温下放置0、2、4、6、8、12 h后进样测定。结果显示，维生素B1、维生素B2、烟酰胺、维生素B6、泛酸钙色谱峰面积的RSD分别为0.25%、0.17%、0.50%、0.45%、0.82%。

2.6加样回收试验在溶出杯中按配方加入复方维生素B片②的辅料，取维生素B1、维生素B2、维生素B6与泛酸钙对照品配置成每毫升各含500、450、50与200μg的混合溶液，分别取2、5、8 mL各3份，置于溶出杯中；取烟酰胺对照品配置成每毫升含1 mg的溶液，分别取5、10、15 mL各3份，置于上述溶出杯中，每个溶出杯加入0.005 mol∕L盐酸至100 mL，按“2.2.2”项下的方法，记录色谱图见图1，由结果可知，维生素B1、维生素B2、烟酰胺、维生素B6、泛酸钙的平均回收率分别为98.0%、98.7%、99.2%、96.0%、95.5%；RSD分别为0.45%、0.40%、0.19%、0.85%、0.90%（n＝9）。表明该方法回收率良好。

表1 回归方程、检测限和定量限

图1 各成分的高效液相色谱图：A为对照品溶液280 nm，B为对照品溶液210 nm，C为样品溶液280 nm，D为样品溶液210 nm

3 讨论

3.1检测波长的选择利用DAD检测器，在各个波长处测定各个组分的吸收，确定最大吸收波长，同时兼顾各个组分定量测定的需要，最后选择280 nm作为维生素B1、维生素B2、烟酰胺、维生素B6的测定波长，选择210 nm作为泛酸钙的测定波长。

3.2流动相的选择流动相中加庚烷磺酸钠，和一定量三乙胺是为了改善组分的峰型和保留时间以及消除拖尾，试验过程中发现pH值对维生素B1和维生素B2峰的保留时间也有影响，过低过高都不能达到理想的色谱分离或者总时间。由于泛酸钙检测波长为210 nm，考虑到甲醇的截止波长为205 nm，故有机相确定为乙腈。经反复试验，最后将流动相优化成为5 mmol∕L庚烷磺酸钠水溶液（含0.15%三乙胺，用冰醋酸调节pH值至5.0）为流动相A，乙腈为流动相B，梯度洗脱。

3.3溶出度取样时间及溶出介质的选择根据“2.2.2”项下方法，分别以50和100 r∕min的转速，以水、0.1 mol∕L盐酸溶液和0.005 mol∕L盐酸溶液，于10、20、30、45、60 min取样1 mL（同时补充预热至37℃的溶出介质1 mL），测定溶出百分率。根据测定结果，在水中泛酸钙的溶出量偏低；在0.1 mol∕L盐酸溶液中，各组分的溶出量都偏低；在0.005 mol∕L盐酸溶液中50 r∕min时在45 min时5种维生素的溶出率都达到95%以上；100 r∕min时在20 min时5种维生素的溶出率都达到95%以上。综合以上结果，选择100 r∕min，取样时间为20 min的溶出条件。因维生素B2对光较敏感，见光易分解，故应避光操作。

4 结论

本方法准确，简便，可作为现行质量标准的补充，测定复合维生素B片中五种维生素的溶出度，更全面评价该制剂的质量。